PCR의 원리 및 실습

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목차

7R-1. 실제 PCR효율은 이론적인 것 보다 휠씬 떨어진다. 왜 PCR효율이 예상
되는 것 보다 낮아지는 지 그 이유를 설명하라.

7R-2. Reverse Transcriptase-PCR과 Real Time-PCR을 비교설명하라.

7R-3. 범죄현장에서 피가 뭍은 옷이 두 벌 발견하였다. 두 벌에 존재하는 피가 동일인 인지 아니면 서로 다른 사람인지 PCR기법으로 밝혀낼 수 있다. 어떻게 하면 쉽게 알 수 있는 지 설명해 보라.

본문내용

7R-1. 실제 PCR효율은 이론적인 것 보다 휠씬 떨어진다. 왜 PCR효율이 예상
되는 것 보다 낮아지는 지 그 이유를 설명하라.

: 이상적인 PCR반응의 효율은 100%가 되어야 하는데, 실제 PCR효율은 그것보다 떨어진다. 실제 실험의 효율은 증폭된 사이즈, 이차구조, GC의 양등이 PCR 효율에 영향을 줄 수 있다. 다른 조건 역시 PCR 효율에 영향을 미치게 되는데 최적화 되지 않는 시약들의 농도나 효소의 품질 등은 효율을 90%이하로 낮출 수 있고, PCR inhibitor와 같은 것들이 시약내에 존재하는 경우에는 PCR효율을 110% 이상으로 가시시킬 수 있다.

<중 략>

PCR과정에 필요한 4가지 요소는 증폭하고 싶은 주형 DNA, DNA중합효소, 프라이머, 뉴클레오티드 이다.
주형 DNA는 90도 이상의 열을 가하면 변성이 되어 2가닥으로 분리된다. 이 변성과정을Denaturation이라고 한다.
온도를 60도로 낮추어 분리된 DNA 양 말단 염기서열과 상보적인 프라이머가 결합한다. 온도를 낮추게 되면 분리된 두가닥의 DNA가 다시 결합하는 경향을 보이지만 짧은 가닥의 프라이머가 많은량으로 존재하게 되면 주형 DNA와의 경쟁에서 프라이머와 DNA가 결합하려는 경향이 더 강하기 때문에 이중나선 구조는 형성되지 않는다.

참고 자료

없음