재조합 단백질의 발현

목차

1. 8R-1. T7 promoter 에 의한 단백질 발현 시스템을 설명하라.
2. 8R-2. 진핵세포단백질을 원핵세포에서 발현할 때 Inclusion body가 형성되기도 한다. 왜 이런 현상이 일어날 수 있는 지 설명하라.
3. 8R-3. 외래단백질의 발현시 단백질분해를 막기 위하여 BL21균주를 사용하기도 한다. 어떤 원리로 단백질 분해를 방지할 수 있는 지 설명하라.

본문내용

8R-1. T7 promoter 에 의한 단백질 발현 시스템을 설명하라.
: T7 promoter는 bacteriophage T7의 RNA polymerase (T7 polymerase)에 특이적으로 발현되는 promoter sequence이다. (대장균의 RNA polymerase로는 발현률이 아주 낮음)
BL21 균주는 lac promoter에 T7 polymerase를 가지고 있다. 따라서, iPTG 등을 사용해서 lac promoter를 induction시키면 T7 polymerase가 만들어지고, 이 T7 polymerase가 expression vector(pRSET이나 pET 계통이 대표적)의 T7 promoter에 재조합된 단백질 유전자를 발현시킨다.

※참고)
이렇게 두 단계를 거치는 것은 induction하지 않았을 때 발현을 낮추기 위함이다. 대장균이 정상적으로 생장하기 전부터 외래단백질을 만들기 시작하면 대장균의 생장에 해가 될 수 있고 결국에는 발현시킬 수 있는 외래단백질의 양을 감소시킨다.

참고 자료

없음