재조합DNA의 제조 (제한효소 및 ligase효소반응)

목차

4R-1. Cloning vector로서 pBR322와 pUC18 DNA를 이용하였을 경우 재조합 DNA의 선별방법을 설명하라.
4R-2. Single Restriction Enzyme으로 절단된 vector의 경우 self-ligation 으로 인하여 외래 DNA가 삽입되는 효율이 매우 낮다. 이 경우 어떻게 하면 외래DNA를 쉽게 삽입시킬 수 있을 지 의견을 제시해 보라.

본문내용

4R-1. Cloning vector로서 pBR322와 pUC18 DNA를 이용하였을 경우 재조합 DNA의 선별방법을 설명하라.

※재조합 DNA를 선별방법이 필요한 이유
: 클로닝의 주요목적 중에서정제기능이 있다. 우리가 벡터를 잘라서 잘라진 공간에 유전자를 넣는데 우리가 원하는 재조합 DNA 분자가 들어가기도 하고 원하는 유전자가 아닌 다른 유전자들도 들어갈 수 있다. 즉, 잘못된 재조합 DNA 분자도 있고 DNA 조각이 들어가지 않고 그냥 self-ligation된 DNA도 있다. 그래서 클로닝 한다는 것은 우리가 원하는 DNA만 골라내는 작업이라고 할 수 있다.

<중 략>

-베타-galactoside)를 함유한 plate에서 증식시키게 되면 균체 내로 침투한 X-gal이 생산된 베타-galactosidase에 의해 분해되어 청색의 colony를 만든다. 베타-galactosidase 생산유전자상의 multi-cloning 부위에 DNA단편이 cloning되면 베타-galactosidase유전자는 불활성화되면서 백색으로 된다. 즉 클로닝이 안되면 lac Z 유전자가 거의 파괴되지 않아 X-gal plate에서 blue colony가 형성되고, 클로닝이 성공하면 lac Z는 파괴되고 따라서 white 가 생성된다. 이런 방법으로 클로닝 여부를 알 수 있다.

참고 자료

없음