형질전환 실험(Plasmid DNA를 이용하여 E.coli 형질전환)

목차

1.실험 제목
2.실험 목표
3.실험 날짜
4.실험 전 사전 지식
5.실험 재료 및 기구
6.실험 방법
7.실험 결과
8.고찰
9.Reference

본문내용

1.실험 제목: 형질전환

2.실험 목표:
① 세균의 유전형질전환 원리와 과정을 이해한다.
② Plasmid DNA를 이용하여 E.coli의 형질전환 및 E.coli의 수용세포 준비에 필요한 절차, 형질전환된 박테리아를 선별하는 과정 등을 이해한다.

3.실험 날짜: 2013년 5월 29일 (수)

4.실험 전 사전 지식:
*MCS(Multiple cloning site): 제한효소가 작용할 수 있는 부위를 인위적으로 한꺼번에 모아놓은 부분으로 제한효소로 플라스미드 일부분을 잘라서 다른 DNA를 삽입시킬 때, 다양한 제한효소가 작용할 수 있는 자리를 만들어 놓음으로써 유전자 재조합이 용이하게 이루어 질 수 있도록 한다. MCS부위는 길어야 100~150bp 정도이다.

<중 략>

5.실험 재료 및 기구: Competent cell(E. coli DH5a), Plasmid DNA(10ng/ml pUC19), LB 배지(Luria-Bertani medium), Ampicillin, Muller Hilton agar, IPTG (β-D-isoprophyl-thiogalactopyranoside; 2g of IPTG / 10mg of DW), X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-galactopyranoside) (50mg/ml X-gal in DMF), Eppendrof tube, petri dish, 유리삼각봉, 알코올램프, 배양기, Autoclave, Ice box, water bath, HIT competent cell, Sterilized dH2O)

6.실험 방법:
① 10㎕의 IPTG가 들어있는 E. tube에 X-gal 40㎕를 넣고 잘 섞은 후 LB plate(contained 100㎍/ml Ampicillin)에 넣고 유리삼각봉(화염멸균하고 잘 식힌다)으로 골고루 도말한다.
② 37℃로 조절된 배양기(Incubator)에 넣어둔다.

참고 자료

민철기, 강창수 / 생물학실험서 / 라이프사이언스 / 2004.1.20 초판 2006.1.15 수정판
경희대학교 생물학과, 한양대학교 생명과학과 교수진 공저 / 일반생물학실험 /범문에듀케이션 / 2010.03.05