플라스미드 DNA 추출2

목차

1. 이론
2. 준비물
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 고찰
6. 참고문헌

본문내용

1. 이론
겔 전기영동(gel electrophoresis) : 폴리아크릴아미드나 녹말을 겔상태로 만들어 운반체로 이용하는 전기영동법. 튜브모양의 겔도 사용하지만 평판상 겔(슬라브겔)이 주류이다. 겔담체는 열의 대류현상 예방을 위해 도입되었는데, 취급이 쉽고 다른 특성이 있는 막에 전사할 수 있으며 그물눈의 체효과를 이용할 수 있는 등 여러 가지 장점이 있어서 생체고분자의 분리, 분석에서 없어서는 안 되는 요소가 되었다. 단백질에는 분자량에 거의 비례하여SDS(도데실황산나트륨)가 결합하므로 폴리아크릴아미드겔 내에서 전기영동하면, 그물눈으로 차단되는 정도에 따라 양극으로 이동하는 속도에 차이가 생긴다.
플라스미드(plasmid) : 미생물의 염색체 DNA와는 독립적으로 존재하여 자율적으로 복제하여 안정하게 유전할 수 있는 핵외 유전자를 말한다. F인자(F factor), 박테리오신(bacteriocin) 생산인자(Col E1), 약제내성인자, 대사산물 관련인자 등의 기능을 발현하는 것이 알려지고 있지만 기능이 분명히 되지 않은 것도 있다. 보통의 조건에서는 기본적으로 숙주의 생육에 필수적인 유전인자가 아니다. 숙주 염색체 DNA에 삽입되어 있는 것도 있다. 플라스미드는 그 자율적 복제능과 안정한 유전능으로 인해 미생물의 유전자조작에서 벡터 DNA로 이용되고 있는 것이 많고, 대표적인 것으로 대장균 ColE1 유래의 pBR322나 pUC계 벡터 등이 있다.

<중 략>

처음에 lysis 전 단계에서 P1 buffer으로 부유시킨 후에 lysis 단계에서 P2 buffer를 첨가하면 세포벽이 깨져버려서 세포질의 내용물이 다 나오게 된다. P1 buffer는 Tris-Cl, EDTA, glucose 또는 sucrose으로 구성되어 있다. Tris-Cl은 pH를 맞추어주기 위한 것이고, EDTA는 +2가 이온들과 결합하는 성질이 있어 Ca, Mg과 같은 이온과 결합할 수 있다. 이 의미는 세포벽에 포함된 2가 Ca, Mg과 같은 2가 이온들과 결합함으로써 세포벽이 군데군데 깨지게 하는 역할을 하며 세포가 깨지지 않도록 glucose나 sucrose가 들어가 삼투압을 유지시켜 준다.

참고 자료

캠벨 생명과학 9판 (바이오사이언스, 2012.8.10) REECE 외 4명, p.381~449
일반생물학 실험 (동아대학교 출판부, 2009) 김민주, p275, 276
http://terms.naver.com/entry.nhn?cid=562&docId=430011&mobile&categoryId=562
http://terms.naver.com/entry.nhn?cid=577&docId=297951&mobile&categoryId=577