ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)

목차

Ⅰ.실험 제목

Ⅱ.실험 목적

Ⅲ.원리
(1) ELISA의 원리
(2) Indirect ELISA

Ⅳ.실험재료

Ⅴ.실험방법

Ⅵ.결과

Ⅶ.토론
(1)결과분석
(2)오차의 원인 분석
(3)ELISA의 장점은?
(4)ELISA의 다른 적용이 있는가?
(5)ELISA assay가 특정한 단백질-단백질 상호작용을 분석하기위해 적용될 수 있는가?
(6)Indirect ELISA와 Sandwich ELISA를 비교하여라
(7)ELISA용 plate well은 protein이 흡착되고 e-tube는 protein을 보관하는 용도이다. 같은 플라스틱 재질인데 용도가 다른 원리는 무엇인가?

Ⅷ.참고문헌

본문내용

Ⅰ.실험 제목
ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)

Ⅱ.실험 목적
ELISA의 수행 과정과 진단시험에 적용되는 방법을 알고 antibody-antigen, receptor
-ligand, enzyme-substrate의 특정 단백질-단백질 상호작용을 이해한다.

Ⅲ.원리
(1) ELISA의 원리
ELISA는 항체에 효소를 결합시켜 항원-항체 반응을 확인하는 방법으로, 그 방법이 간단하고 비용이 많이 들지 않으며 다량 분석이 가능하여 현재 가장 널리 쓰이고 있는 항원-항체 분석법의 하나가 되고 있다. 특히 이 방법은 방사능면역시헙법 (RIA, Radio ImmunoAssay)과 같이 매우 민감한 반응이면서도 RIA에서처럼 방사능을 사용하지 않는다는 이점이 있어서 그 사용이 증가되고 있는 방법이다.
항체에 결합되는 효소 중에는 간단한 기질 용액을 넣어주면 색깔을 띠는 반응이 이용되는 데, 대표적인 효소로는 염기성인산분해효소 (alkaline phosphatase)나 고추냉이과산화효소 (HRP, horseradish peroxidase) 등이 많이 이용되고 있다. 이들 효소는 항체분자의 Fc 지역에 공유결합 되도록 화학반응을 이용하여 결합시켜 사용한다.
(2) Indirect ELISA
항원과 결합하는 항체 (1차항체, primary antibody)에는 효소가 없고, 그 항체와 결합하는 항체 (2차항체, secondary antibody)에 효소가 결합되어 있는 분석방법. 일반적으로 isotype에 대한 항체에 효소가 결합된 형태 (enzyme conjugated anti-isotype antibody, 예를 들어 alkaline phosphatase conjugated anti-mouse IgG 등)으로 판매되고 있으며, 자신이 이용하는 일차항체의 급 (isotype)에 맞는 효소결합항체를 구입하여 사용하면 된다.

참고 자료

2013.05.26.http://home.inje.ac.kr/~lecture/immunollab/lab03.htm
위키피디아 백과사전.2013.05.26.http://en.wikipedia.org/wiki/ELISA.htm
BRIC 실험.2013.05.26.http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php Board=expqn aid=213155ksr=1FindText=96well%20plate.htm