SDS-PAGE, Western blot

목차

1SDS-PAGE
1) SDS-PAGE?
2) SDS-PAGE의과정

2. WESTERN BLOT
1) WESTERN BLOT?
2) WESTERN BLOT의 과정

본문내용

SDS-PAGE
SDS-PAGE(Sodiumdodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)
단백질 질량의 차이를 이용한 분리방법. SDS라는 세제를 이용하여 모든 단백질이 동일한 (-)전하를 띄도록 만든 후 질량에 의해 polyacrylamide gel 상에서의 이동속도 차를 이용하여 분리한다.
SDS-PAGE의 효과적인 분리 범위는 polyacrylamide의 농도와 교차연결 정도로 결정되며 교차연결시키는 물질이 없는 상태에서 형성된 acrylamide polymer는 쓸모없는 점액성 용액을 이루게 된다.

<중 략>

DTT 4% SDS 0.2% bromophenol blue 20% glycerol)
-단백질은 5분간 90도에서 denaturation시킨다.
-단백질을 loading하기 전 well을 씻어준다.
-단백질을 loading한다.
-혼합단백질을 SDS-PAGE에 전기영동한다.(100mA, 단백질이 젤의 끝까지 내려올 때까지)
-전기영동이 끝난 후 젤을 Transfer buffer에 넣는다.
④단백질 transfer ; Transfer는 단백질을 나일론 막으로 옮기는 작업이다.
-Millipore immobilon tranfer membrane을 젤크기에 上 자른다.

참고 자료

없음