lymph node and Splenocyte

목차

Ⅱ. Materials
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Method
Ⅳ. Result
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Reference.

본문내용

Ι. Introduction
본 실습의 목적은 쥐를 해부하여 spleen을 적출한 후 splenocyte를 분리하여 배양하고, 그 결과를 확인하는 것과, 쥐의 lymphoid organ들을 적출해내서 다양한 lymph node들과 thymus 등 lymphoid organ들의 위치와 겉모양 등을 알 수 있다. MTT assay 를 통해 splenocyte의 증식 정도를 알아내어 conA 농도에 따른 증식의 효과를 알아보는 것이다.

실험에 사용된 개념에 대해 알아보면
가) MTT assay: MTT assay는 세포의 성장을 알아보는 방법중 하나이다. yellow tetrazolium salt MTT는 살아있는 세포에서 물에 녹지 않는 보라색의 formazan crystal로 환원된다. 이 크리스탈은 나중에 DMSO로 녹여서 생성된 크리스탈의 양을 분광학적인 방법 (Spectroscopic method)으로 측정한다. 살아있는 세포의 수가 많을 수록 이 크리스탈의 생성도 많아지므로 이러한 방법을 통해 세포의 성장을 쉽게 측정할 수 있다. DMSO가 하는 일은, water insoluble한 formazon을 dissolve하는 것이다. 제대로 용해된 용액이어야 OD 값을 측정할 수 있기 때문이다. Spectrophotometer를 이용해 570nm에서의 absorbance를 구하면 보라색을 띠는 반응 생성물이 얼마나 생겼는지 Lambert-beer의 법칙을 통해 구할 수 있고, 이를 통해 살아있는 cell의 양을 알아낼 수 있는 것이다.

나) Mitogen: 세포 분열을 유발하는물질. 면역학적으로는 항원 비특이적(다중클론성)으로 림프구를 유령화하여 분열을 유발시키는 것을 말한다. 거의가 식물유래의 렉틴이지만 동물유래인 것도 있다. 콘카나발린A, PHA(제비콩렉틴), PWM, 지질다당, 스트렙토리신S, 염화수은(Ⅱ)등의 수은화합물, 항림프구항체 등이 분열촉진제에 포함된다. 콘카나발린A, PHA 등과 같이 T세포에만 작용하는 것, 지질다당 등과 같이 B세포에만 작용하는 것, PWM과 같이 두 림프구에 작용하는 것이 있다.

참고 자료

Abul K. Abbas, Cellular and Molecular Immunology 7/ed., 2011, Elsevier