대장균 형질전환 실험 레포트

목차

1. 결과
2. 원리
3. 고찰

본문내용

1,3조는 플라스미드 DNA를 수용능 세포에 섞어주었고 2,4조는 섞어주지 않았다.(control)
이 때 열충격과 cold충격 등을 한 뒤 배지에 배양한 뒤 생장 패턴을 확인해보면 위의 사진과 같이 1,3조의 배지에서는 세균의 콜로니가 거의 발견되지 않고, 2,4조의 배지에서는 많은 수의 콜로니를 관찰할 수 있다. 콜로니의 수가 많이, 셀 수 있게 나타나는 것은 플라스미드 DNA가 수용능 세포를 형질전환 시켜서 항생제 저항성으로 변환되었음을 의미한다. 항생제 저항성으로 변화되었기 때문에 암피실린이 있는 고체 배지에서도 생장할 수 있는 것이다.

플라스미드 DNA를 수용능 세포에 섞어준 뒤 열 충격을 가하는 이유는 세포막을 느슨하게 하여 플라스미드 DNA가 세포 내로 삽입될 수 있도록 하기 위함이다. 그 후 다시 얼음으로 cold 충격을 준 뒤 37도에서 배양한다. 이는 expression 단계로, 살아있는 세포는 증식하여 자라도록 하기 위함으로, 실험결과를 더 안정적이게 하고 싶다면 1시간 이상 37도에서 배양하기도 한다. 그 후 세포들을 원심분리하는데, 이 때 세포들이 죽지 않고 살아있게 하기 위해서는 5000rpm이 넘지 않도록 하는 것이 좋다. 그 후 세포를 회수하여 암피실린이 있는 고체 배지에 도말한 뒤 콜로니의 수를 체크한다.

참고 자료

전상학(2009) 유전학의 이해. 라이프사이언스, 서울. pp.267-271.