Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase

목차

I. Introduction
II. 도구
III. 실험방법
IV. 결과
V. 토의
VI. 참조

본문내용

I. Introduction
 정제 후 단백질을 확인하는 방법에는 항원항체 반응을 이용하는 western blot과 효소의 활성도를 비교하는 방법이 있다.
 Spectrophotometer
일반적으로 빛이 물체와 만나면, 물체의 표면에서 반사되거나 물체에 흡수되거나 물체를 통과한다. 이 중 빛의 흡수현상을 이용하여 시료 용액 중의 빛을 흡수하는 화학물질의 양을 정량할 수 있다. 주로 자외선이나 가시광선 영역에서의 빛의 흡수되는 정도를 측정하는데 빛이 시료를 통과하게 되면 일부 흡수되기 때문에 빛의 광도가 달라짐을 이용한다. 물체에 흡수되는 빛의 양은 흡광물질의 농도마다 다르기 때문에 흡광도를 통해 흡광물질의 농도를 알 수 있다.
 Colorimetric determination of alkaline phosphatase activity
Alkaline phosphatase라는 enzyme을 이용하여 효소반응속도를 학습할 수 있다. 이 때 염기성 탈인산가수분해효소인 AP는 여러가지 인산에스테르 화합물을 가수분해하여 무기인산을 생성시키는 광범위한 기질특이성을 가지고 있는 효소이다. 이러한 기질 중의 하나인 para-nitrophenyl phosphate(PNPP)는 색깔이 없는 물질로 AP를 첨가하여 가수분해 되면 진한 황색을 띠는 para-nitrophenol(PNP)이 생성된다.

즉, 무색인 PNPP에 AP를 처리하면 진한 황색을 띠는 PNP가 생성되므로 이 PNP를 405nm에서 흡광도를 측정함으로서 효소의 활성을 측정할 수 있다.
 Specific activity of enzyme
단백질 1mg 효소 단위수. 효소 1단위는 일정한 조건하에서 1분간에 1u mole의 기질변화를 촉매하는 효소량을 뜻한다. 효소의 정제 순도가 높을수록 증가된다.

참고 자료

http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1913800&cid=2905&categoryId=2905
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=293255&cid=353&categoryId=353
http://blog.naver.com/kirokkk123?Redirect=Log&logNo=90192000785