생물화학공학실험 Liquid culture & Expression

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
이번실험은 액체배지 배양과 단백질 발현 조건에 대하여 알아보는 실험이다.
먼저 액체배지를 제조 한다. 배지의 조성으로는 Tryptone / Yeast Extract / NaCl 이 포함되며 Tryptone은 질소의 공급원이며 Yeast Extract는 영양소와 효모를 갈아 만든 것으로 양분을 제공하는 역할을 한다. 배지를 만든 후 Autoclave로 멸균을 하고 Clean-bench에서 식힌 후 Ampicillin을 넣는다. 미리 배양된 세포 eGFP를 넣은 후 배양을 시작한다.

<중 략>

(2) 실험방법
➀ 50ml LB배지 2개를 만든다.
➁ 만들어진 LB 배지를 Autoclave로 멸균한다. (※ Autoclave 사용 시 주의)
➂ 멸균된 LB 배지를 꺼내 Clean-bench에서 60℃ 이하로 식힌 후, LB 배지에 Ampicillin을 50μl씩 넣는다.
➃ 미리 배양 된 세포(eGFP DNA 포함) 5ml을 플라스크에 넣은 후, shaking incubator에서37℃로 배양을 한다.
➄ 대조군으로 미리 배양 된 세포(eGFP DNA 미포함) 5ml을 나머지 플라스크에 넣은 후, shaking incubator에서 37℃로 배양을 한다.
➅ 1ml을 sampling 하여 O.D 값이 0.6~0.8사이가 되면, 각각의 플라스크에 IPTG(100X)를 넣어준다.

<중 략>

4. Discussion
우리가 사용 하는 vector는 pet-22(+) 이고 이것을 증식시킨 것 competent cell이 증식된 (colony)를 이용하여 lac operon을 이용하여 원하는 단백질을 발현시키는 실험이다.
우리 조는 실험결과가 잘 나왔지만, 잘 안나온 경우에 대해 이유를 써보려고 한다.
1) mRNA가 나오지 않은 경우
실제 lactose를 쓰면 억제자가 떨어졌다가 분해가 끝나고 나면 억제자(repressor)가 다시 붙기 때문에 우리는 실험에서 IPTG를 사용하였다.

참고 자료

없음