p63에 의한 세포 사멸 분석

목차

Ⅰ.실험 제목
Ⅱ.실험 목적
Ⅲ.원리
Ⅳ.실험재료
Ⅴ.실험방법
Ⅵ.결과
Ⅶ.토론
Ⅷ.참고문헌

본문내용

Ⅰ.실험 제목
단백질 확인 및 세포사멸 분석하기

Ⅱ.실험 목적
p53이 없는 체세포에 손상을 주었을 때 p63에 의한 세포 사멸이 일어나는지 확인하고 세포 사멸 기작을 이해한다.

Ⅲ.원리
(1) DNA damage response
IR, UV, Chemical reagent에 의해 DNA가 손상을 받으면 MRN complex(Mre11, Rad50 and Nbs1)가 DNA break를 인식한다. 그러면 ATM/ATR등의 kinase가 DNA를 인산화 시켜 p53과 같은 transcription factor들이 작동하기 시작한다. 세포가 약한 손상을 입었을 경우엔 손상이 복구될 때까지 세포주기를 억제시키면 된다. 그러나 강한 손상을 입었다면 돌연변이나 염색체 이상을 일으켜 암을 유발할 수 있기 때문에 세포 사멸이 이루어 져야한다.
대표적인 transcription factor인 p53은 DNA의 손상으로 활성화되는 단백질로서 세포주기가 멈추면 DNA 복구에 필요한 유전자들을 발현시킨다. 만약 DNA 손상을 복구할 수 없을 경우, p53 단백질은 자살유전자를 발현시켜 세포 사멸(apoptosis)을 일으킨다. 이러한 방식으로 p53은 DNA 손상으로 인해 돌연변이를 지닌 세포의 분열을 방지한다. 따라서 p53을 발현시키는 유전자가 제대로 기능을 하지 못하게 되면, 돌연변이가 축적된 세포가 생존하여 계속 분열하게 되고 결국 암으로 진행된다.
(2) TAp63
TAp63는 p53 유전자와 homologue인 p63의 6가지 isoform 중 하나로서, 여성 생식세포에서 과하게 발현되어 있다. 또한 DNA가 손상되었을 때 난모세포의 사멸을 유도하는 역할을 한다.
(3) Fetal Bovine Serum
세포 및 조직배양에서 많이 사용되는 혈청으로서 growth factor, protein을 공급하여 세포 증식에 도움을 준다.

참고 자료

abcam, 2014.03.20, http://www.abcam.com/rabbit-mouse-igg-hl-hrp-ab970 46.html
BRIC 실험, 2014.03.15, http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?Board=e xp_qna&id=27967
Campbell, Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky, Jackson(2008), 『Campb ell Biology, 8th Edition』, 전상학(편), Bioscience, pp.376
David L. Nelson, Michael M. Cox(2008),『LEHNINGER PRLNCLPLES OF BIOCHEMISTRY 5th edition』, FREEMAN, pp.173
Dr. Bruce Alberts, Dennis Bray, Karen Hopkin, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, Peter Walter(2012), 『Essential Cell Biology, 3th Edition』, 박상대(편), Garland Science(교보문고), pp.758-760
Lady Davis Institute for Medical Research, 2014.03.15, http://www.ladydavis. ca/en/DNAdamage
Product Search, 2014.03.19, http://www.scbt.kr/datasheet-53133-ulbp4-6e 6-antibody.html
대일랩서비스 부설 두젠 생명공학 연구소, 2014.04.05, http://www.itsbio.co.kr/ main/goods_view.php?category2=57&no=119
한국교원대학교 과학교육연구소(2011),『화학실험』, (주)금성출판사, pp.55