[분자생물학]Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography

소개글

펩타이드 및 단백질 정제에 흔하게 이용되는 HPLC인
Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography(역상 HPLC)에 대한 소개 자료입니다.

목차

1. Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography
2. 이동상 조성에 따른 분류
3. RP-HPLC Materials
4. RP-HPLC Methods
5. RP-HPLC elution profile illustrating the purification of a synthetic peptide.
6. The Ligands
7. C18 Column
8. Free Silanol
9. Column Packing Geometry
10. Column Dimensions
11. The Ionic Additive
12. Mobile phase
13. Gradient Time and Shape
14. LC컬럼의 특성 - I
15. LC컬럼의 특성 - II

본문내용

역상(Reverse Phase)
고정상이 비극성이고 이동상이 극성이고, 극성화합물이 먼저 분리
작용기는 탄소수가 8개 또는 18개인 비극성 체인으로 이루어짐

1. 비극성의 고정상과 극성의 이동상을 사용하는 HPLC 모드의 총칭
2. 소수성이 높은 컬럼 충진제 사용
3. 극성 유기용매로 용질을 용출
4. 비극성 내지는 약한 극성의 화합물 분리에 적합
5. 생화학, 의약화학 분야에서 널리 응용
6. 단백질이 변성되는 경우가 많음

<중 략>

Effect of gradient time on the reversed phase chromatography of tryptic peptides of porcine growth hormone.
Column : Bakerbond (J. T. Baker) RP-C4, 25 cm × 4.6 mm id, 5 μm particle size, 30 nm pore size.
Conditions, linear gradient from 0–90% acetonitrile with 0.1%TFA over 30 min (top), 60 min (middle), or 120 min (bottom) at a flow rate of 1 mL/min, 25°C. (Reproduced from ref. 1 by permission of Academic.)

참고 자료

Methods in Molecular Biology Vol. 251
HPLC of Peptides and Proteins Methods and Protocols, p9~22