[생화학실험] 제한효소 절단 및 탈인산화한 vector 정제, ligation

목차

1. 실험 날짜
2. 실험 제목 및 목적
3. 개요 – 이론 및 실험 원리
4. 실험재료 및 방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

DNA ligase 정의 및 종류
DNA 2본쇄의 절단된 폴리뉴클레오티드(polynucleotide) 가닥에서 인접한 5'-인산기 말단과 3'-수산기 말단사이를 인산이에스테르결합으로 연결하는 효소로 DNA 분자들을 연결시켜 준다. 효소의 활성에 필요한 보조인자에 의해 대장균에서 분리한 것과 T4 파지감염균에서 분리한 것으로 구별된다. 대장균에서 분리한 DNA 연결효소는 NAD를 필요로 하고 상보적인 1본쇄 영역을 갖는 DNA 말단을 연결한다. T4 파지감염균에서 분리한 것은 ATP를 필요로 하며 상보적인 1본쇄 영역을 갖는 DNA 말단 외에 완전히 쌍을 이룬 2본쇄 DNA 말단도 연결한다. E. coli DNA ligase, T4 DNA ligase, Mammalian ligases, Thermostable ligases 등이 있다. E. coli DNA ligase는 lig gene에 의해 인코딩 된다. 대장균 뿐만 아니라 인산이에스테르결합를 생성하기 위해 NAD를 쪼갬으로써 얻어진 에너지를 사용하는 원핵생물에도 있다.박테리오파지 T4에서 나온 T4 DNA ligase는 가장 일반적으로 실험실 연구에서 사용되는 ligase이다. 이 ligase는 DNA의 cohesive ends,oligonecleotides 뿐만 아니라 RNA,RNA-DNA혼성체, 단일가닥이 아닌 핵산도 연결한다. 또 E.coli DNA ligase보다 무딘끝을 연결하는데에 더 효율적이다. E.coli DNA ligase와 다르게 T4 DNA ligase 는 NAD를 활용하지 않고 보조인자로 ATP를 사용한다.

참고 자료

http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=435966&cid=577&categoryId=577
http://www.nanohelix.co.kr/shop/goods/goods_list.php?&category=001001
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=520025&cid=577&categoryId=577
http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_ligase
http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_ligation
http://blog.naver.com/withcoffee67?Redirect=Log&logNo=70160635571