[KAIST] 생화학 실험 보고서

목차

Ⅰ. Abstract & Introduction

Ⅱ. Materials and Methods & Principle
1. DNA 재조합 및 Purification
A. Cloning vector (pET21-Mal-Tev vector) 를 증식하기 위한 Transformation
B. Plasmid DNA Mini-Preparation
C. PCR (Polymerase Chain Reaction) & PCR product Purification
D. Ligation & Transformation
E. Cloning Check Test
2. 단백질 발현 및 Purification
A. Recombinant DNA의 발현을 위한 IPTG Induction & SDS-PAGE gel running
B. Protein Purification
a. Sonication
b. Protein tagging and affinity purification
c. Bradford assay & Protein staining
d. Ion exchange chromatography
C. Protein Activity Test

Ⅲ. Results and Discussion

Ⅳ. References

본문내용

Ⅰ. Abstract
우리는 이 실험에서 T4 ligase의 형질을 지니는 gene을 plasmid vector에 클로닝 하여 recombinant DNA를 만들 것이다. 그 후 recombinant DNA가 만들어졌는지 확인한 후에 T4 ligase의 protein으로 발현하는 과정을 거쳐 실제로 ligase activity가 나타나는지 실험할 것이다.

Ⅰ. Introduction

동식물 하나의 개체에서 무성생식에 의해 양친과 동일한 유전자 조성을 가진 개체를 얻는 기술, Cloning 기술의 발전으로 유전학과 분자 생물학에 발전을 박차며 새로운 과학 기술의 시대가 도래했다. 이 Cloning 기술은 암수의 유전자가 서로 섞이지 않으며 우수한 품종을 보존할 수 있다. 1963년, J.B.가든은 아프리카개구리의 체세포에서 핵을 꺼내어, 그것을 핵을 빼낸 알에 이식해서 새로운 개체를 만드는 데 성공하였으며 포유류에서는 스위스의 K.이르멘제 등이 흰쥐를 사용해서 실험에 성공하였다.

<중 략>

맨 왼쪽은 T4 ligase가 없는 대조군(negative control)이고 맨 오른쪽은 상용 T4 ligase인 positive control이다. 여기서 대조군은 T4ligase가 없을 때의 band pattern을 확인하기 위해서 이며, 실험군 세 개는 ligase 농도차이가 activity에 어떤 영향을 주는지 알기 위해서 사용했다. 그리고 commercial T4 ligase는 이상적인 band pattern을 확인하기 위하여 설정했다.(positive control) 총 10㎕의 용액을 만들었는데, 200mM, ligase 100ng으로 추정한 sample을 각각 다르게 희석해야 하므로 (1/10, 1/5, 1/2) salt concentration을 모두 같게(100mM)로 맞춰주기 위해 20mM PDB를 각각 다른 양으로 넣었다. Salt concentration은 ligase activity에 영향을 미치기 때문에 같은 농도로 맞추어 주어야 해서 위의 표와 같이 solution들을 만들어 주었다.

참고 자료

KAIST 2008 Fall Semester Biochemistry Experiment