분자유전실험 - DNA ligation & transformation

목차

Ⅰ. Abstract

Ⅱ. Introduction
1. DNA ligation
2. Competent cell prep & transformation of E. coli

Ⅲ. Material/Methods

Ⅳ. Results
1. Plate 관찰 사진 및 특징 설명
2. Control 과의 차이점을 서술

Ⅴ. Discussion
1. 결과에 대한 고찰(description)
2. BL21 균주와 DH5α 균주의 차이점을 알아보자.
3. colony에 우리가 넣어준 hsp17.7이 들어있는지 확인하는 방법(3가지)

본문내용

Ⅰ. Abstract

이번 실험의 목표는 첫 번째 실험에서 제한효소 처리되었던 insert(hsp17.7)와 vector를 ligation 하여 재조합 plasmid dna를 만들고, 그것을 E. coli(DH5α) 균주에 형질전환 시킨 뒤 배양하여 cloning시키는 것까지 수행하는 것이다. 그래서 T4 DNA ligase를 이용하여 ligation 과정을 미리 거친 뒤, dna 양을 계산해 ligation mixture를 만들어 competent cell에 주입해 주고 amp 배지위에 도말 후 37℃에서 overnight하여 다음날 형질전환 박테리아가 배양된 상태인 colony의 모습을 관찰하였다.
그 결과, amp배지에 amp에 내성을 가진 형질전환 균주의 colony가 잘 나타나 있음을 통해 ligation product가 잘 만들어 졌다는 것을 확인할 수 있고, 이와 비교하여 positive control 에서 배양된 colony가 모두 amp 내성 유전자를 갖는 즉 온전한 plasmid를 지니고 있다는 특성 때문에 ligation product를 가진 균주보다 상대적으로 많은 colony가 나타난 것을 볼 수 있다. 그리고 비교를 통해 형질전환 균주의 colony 수가 적은 이유는 cut된 vector와 insert만 존재하는 경우를 제외한 나머지인 ligation product만 배양되었기 때문이라 생각할 수 있다. 반대로 d.w를 처리한 negative control에서는 amp 내성 유전자가 없어 아무 colony도 배양될 수 없음을 확인할 수 있다.
이 실험을 통해서 우리가 얻고자 하는 목적 유전자인 hsp17.7이 E. coli(DH5α) 균주 내에서 제대로 Cloning 되었음을 확인할 수 있고, 추후에 hsp17.7유전자를 분리 및 정제하기에 적합한 실험이 수행되었다고 볼 수 있다.

참고 자료

없음