화학 전공 실험 Plasmid Preparation and DNA Restriction

목차

1.Introduction
2.Chemicals (MSDS) and Apparatus
3.Procedure on manual
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1.Introduction
이번 실험은 실험 5의 연장으로서 실험 5에서 PCR을 통해 증폭시킨 GFP의 DNA를 박테리아의 vector plasmid에 주입해주기 위해 plasmid를 적절히 처리하고 처리된 plasmid와 PCR된 DNA를 restriction enzyme (제한효소)으로 처리하는 실험이다. Plasmid란 특정한 박테리아에서 발견되는 원형의 DNA로서 박테리아의 유전정보를 가지고 있는 chromosomal DNA와는 독립적으로 복제되는 DNA이다.
Plasmid는 일반적으로 chromosomal DNA보다 작으며 그 크기는 1kBP (Base-Pair)에서부터 400kBP까지 다양하다. 보통 하나의 박테리아 세포 안에 수 백 개에서 수 천 개까지 많은 plasmid가 존재한다. Plasmid는 항생제에 대한 내성인자 (R 인자)와 성 결정인자 (F 인자)등을 가지고 있지만 plasmid 자체가 박테리아의 생존에 필수적으로 필요한 유전자는 아니고 plasmid는 다른 종의 세포 내에도 전달가능 하다. 즉 plasmid가 변형되어도 박테리아의 증식에는 문제가 없기 때문에 유전공학에서는 이러한 plasmid의 특성을 유전자재조합 기술에 이용한다. Plasmid를 이용한 유전자재조합 기술은 박테리아 안에 있던 plasmid를 세포 밖으로 꺼내어 원형의 유전자를 restriction enzyme으로 일정 부분을 잘라낸 뒤 같은 restriction enzyme으로 잘려진 다른 필요한 유전자를 삽입하고 그렇게 만들어진 plasmid를 다시 박테리아 내부에 넣고 박테리아를 배양하여 필요한 단백질을 얻는 기술이다. 유전재조합 기술에 사용되는 plasmid를 vector라고도 한다. 유전공학에 이용되는 vector plasmid는 앞서 설명한 것과 같이 항생제에 대한 내성 유전자를 가지고 있기 때문에 박테리아 배양과정에서 배지 조건에 특정 항생제를 첨가할 경우 vector plasmid를 가진 박테리아만을 선택적으로 분리할 수 있다.

참고 자료

http://en.wikipedia.org/wiki/ , www.sciencelab.com/ - 여러 가지 chemical들의 MSDS
화학전공실험 매뉴얼 – Procedure 및 Introduction 참고 자료
http://en.wikipedia.org/wiki/Plasmid - Image 1
http://drugster.info/medic/term/restriction-enzyme/ - Image 2
http://www.takween.com/techniques/DNA-electrophoresis.html - Image 4
http://www.rothamsted.ac.uk/notebook/ligation.htm - Image 5
http://www.biochemcs.com/cutting_dna_by_restriction_enzyme.htm - Image 6
http://m.chungeoram.co.kr/product/detail.html?product_no=16 - Image 6