그람염색 결과보고서

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1. 실험목적
그람염색의 방법을 통하여 미생물을 실제로 염색해보고 염색과정을 습득하고, 어떤 원리에 따라 그람음성과 양성으로 나뉘는지 이해한다.

2. 실험재료 및 방법
(1) 실험재료
배양한 세균, 슬라이드 글라스, 커버 글라스, 백금이(loop), 알코올 램프, 피펫, 1.5ml tube, 필터페이퍼, 증류수, 염색 시약(crystal violet, Iodine, safranin), Ethyl alcohol

(2) 실험방법
① 균 준비
② Slide glass를 알코올 램프 불꽃에서 잠깐 동안 가열시켜서 유막을 제거한다.
③ 배양 중인 세균을 넓게 편다.
④ 완전히 건조가 되면 Crystal violet으로 1min 동안 염색 ⇒ 증류수로 세척
⑤ Iodine으로 1min 동안 처리 ⇒ 증류수로 세척
※ 조심해서 다룰 것! 독성이 있음.
⑥ 95% Ethanol로 7초간 처리 탈색 ⇒ 증류수로 세척
※ 이 단계에서는 Ethanol을 너무 오래 처리하게 되면 탈색이 되어 Gram (+)와 (-)을 분별하는데 어려움이 생긴다. 양성균이 음성균으로 나올 수 있다.
⑦ Safranin으로 1min 동안 염색 ⇒ 증류수로 세척
⑧ 공기 중에서 건조한다.
⑨ 현미경으로 저배율부터 관찰한다.

참고 자료

최신미생물학 / 김영재 / 월드사이언스 / 2009
http://www.emrokorea.com/02_em/emis.htm?mmenu=2&smenu=1

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