mini prep 예비보고서

목차

1. 실험목적
2. 실험방법
3. 실험이론
4. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
DNA prep의 과정을 통해 DNA와 DNA의 분리과정에 대해서 알아본 다. 그리고 심분리기의 기능과 사용법에 대해서도 알아보도록 한다.

2. 실험방법
1. 1ml의 배양액에 single colony를 따서 접종하여 37℃에서 overnight 배양한다.
2. 그 배양액을 microfuge tube로 옮긴다.
3. 원심분리(12,000rpm for 30sec)하여 상층액을 버리고 침전물만을 모은다.
4. 100㎕의 차가운 solutionⅠ을 배양된 세포가 들어있는 tube에 넣고 vortex하여 침전물을 완전히 현탁한다.
5. 200㎕의 신선한 solutionⅡ를 넣고, tube를 조심스럽게 대여섯 번 정도 위 아래로 위치를 바꾸면서 섞어주고 얼음에 보관한다.
6. 150㎕의 차가운 solutionⅢ를 넣고 살짝 섞어준 뒤 얼음에 3-5분 정도 보관한다.
7. 원심분리(12,000rpm for 10min)하여 DNA solution과 cell debris를 분리시킨 다.
8. 상층액(DNA solution)만을 조심스럽게 새로운 tube로 옮긴다.
9. 상층액의 2배 양의 ethanol을 넣어 vortex로 섞어주고 상온에서 2분 둔다.
10. 원심분리(12,000rpm for 5min)한다.
11. 상층액을 조심스럽게 쏟아 버리고 상온에서 침전물을 건조시킨다.
12. 건조된 침전물에 차가운 1㎖ ethanol(70%)를 넣고 원심분리(12,000rpm for 5min)하여 침전물을 씻어준다.
13. 상층액을 조심스럽게 쏟아 버리고 뚜껑을 열어 둔 채로 실온에서 5-10분간 침전물을 건조시킨다.

참고 자료

대학미생물학(제 8판) / M.T. Madigan, J.M. Martinko, J. Parker / 탐구당 / 2000
생명과학(이론과 현상의 이해, 제3판) / N.A.Campell 저 / 2001
T.A.Brown / 유전자 클로닝과 DNA분석 / 월드사이언스 / 2008