GST-EGFP 분리실험

목차

1. 목적
2. 원리
3. 기구 및 시약
4. 방법
5. 결과
6. 고찰

본문내용

1. 목적
EGFP단백질을 GST-EGFP퓨전 단백질을 이용하여 분리&정제한뒤 SDS-PAGE법을
이용하여 분리 여부를 확인하여 본다.

2. 원리
ㄱ.affinity column
여러 섞여있는 단백질 중에서 원하는 단백질을 얻기 위한 과정을 3종류로 나누어본다면
capture&intermediate 단계, purification 단계, polishing단계로 나뉘어 질수 있다.
이때, affinity column은 capture&intermediate단계로 볼 수가 있다.
많은 단백질이 뒤섞여 한군데에 존재하면 단백질의 크기나 전하를 통하여 분리 하기가 힘들고 까다롭기 때문에 원하는 단백질만을 capture할 수 있는 affinity column을 사용 하여 첫 번째로 걸러주는 것이다. 즉, column에다가 우리가 가진 단백질이나, 분리해 내 고자 하는 물질과 잘 결합하는 것을 column에다가 충전시켜서, 분리해 내고자 하는 물 질이 담긴 것을 용매(대부분 물)를 흘려보내면서 같이 내려 보내어 우리가 가진 물질만 선택적으로 column에 달라붙게 하여서 다른 물질들은 흘려 보내고, column에 붙은 것 을 떼어내에 분리하는 방법이다. 이번 실험에서는 GST-EGFP퓨전 단백질의 GST부분 과 결합 할 수 있는GST-column이 affinity column으로서 사용되었다.
GST-column에 GST와 결합한 GST-EGFP퓨전 단백질 액체를 통과시켜 주면 GST가 GST-column안의 bead와 결합을 해 걸러지게 된다. GST와 결합하지 않은 다른 많은 단백질은 그대로 GST-column을 통과하게 된다.

참고 자료

http://www.di.uq.edu.au/proj4bproc
http://kaykong.blog.me/130025402893
http://talon.niagara.edu/~391s08/giacomini/SDS-PAGE&NativeGel.html