GST-EGFP 분리실험2

목차

1. 목적

2. 원리
1) affinity column
2) SDS-PAGE
3) Thrombin
4) dialysis
5) chromatography

3. 기구 및 시약

4. 방법

5. 결과

6. 고찰

7. 참고문헌

본문내용

여러 섞여있는 단백질 중에서 원하는 단백질을 얻기 위한 과정을 3종류로 나누어본다면capture&intermediate 단계, purification 단계, polishing단계로 나뉘어 질수 있다.이때, affinity column은 capture&intermediate단계로 볼 수가 있다. 많은 단백질이 뒤섞여 한군데에 존재하면 단백질의 크기나 전하를 통하여 분리 하기가 힘들고 까다롭기 때문에 원하는 단백질만을 capture할 수 있는 affinity column을 사용하여 첫 번째로 걸러주는 것이다. 즉, column에다가 우리가 가진 단백질이나, 분리해 내고자 하는 물질과 잘 결합하는 것을 column에다가 충전시켜서, 분리해 내고자 하는 물질이 담긴 것을 용매(대부분 물)를 흘려보내면서 같이 내려 보내어 우리가 가진 물질만 선택적으로 column에 달라붙게 하여서 다른 물질들은 흘려 보내고, column에 붙은 것을 떼어내에 분리하는 방법이다. 이번 실험에서는 GST-EGFP퓨전 단백질의 GST부분과 결합 할 수 있는GST-column이 affinity column으로서 사용되었다. GST-column에 GST와 결합한 GST-EGFP퓨전 단백질 액체를 통과시켜 주면 GST가 GST-column안의 bead와 결합을 해 걸러지게 된다. GST와 결합하지 않은 다른 많은 단백질은 그대로 GST-column을 통과하게 된다.

<중 략>

SDS-PAGE에서 또한 중요한 것이 바로 아크릴아마이드인데, 이 아크릴아마이드 가 겔의 촘촘함을 결정짓기 떄문이다. 아크릴아마이드 가 상대적으로 많이 포함되면 겔이 촘촘해져서 큰 단백질이 잘 이동을 못하여 작은 단백질과의 비교가 용이해지지만 큰 단백질끼리는 구분이 힘들어 진다는 단점이 있으며 아크릴아마이드를 상대적으로 적게 포함시키면 작은 단백질이 너무 빨리 겔을 빠져나갈 위험이 있기떄문에 구하고자 하는 단백질의 분자량에 맞게 아크릴아마이드의 양을 조절하는 것이 좋다.또한 SDS-PAGE는 stacking gell과 resolving gell 두층으로 나뉘어 있다.

참고 자료

http://www.di.uq.edu.au/proj4bproc
http://kaykong.blog.me/130025402893
http://blog.naver.com/tsngwow/50024736168
http://www.sciencegateway.org/tools/proteinmw.htm