Western blot 결과 고찰 Western blotting

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by 생명과학과
Western blot 실험원리 시약 역할 실험결과 실험고찰까지
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총 3장에 달하는 레포트

목차

1. 실험원리
2. 실험결과

본문내용

Western blotting은 우리가 알고자 하는 단백질을 항원항체 반응을 이용하여 검출해 내는 것이다. Innunoblotting이라고도 한다. 단백질 질량에 의해 분리를 하는 것이므로 단백질의 분자량도 확인할 수 있으며 소량의 단백질도 detection이 가능하다. 또한 항원항체 반응을 이용하기 때문에 높은 특이성을 가진다.
Blotting을 하기 위해서 우선 항원 샘플을 준비한 후에 겔 전기영동으로 resolution한다
<중 략>

Blocking을 끝내면 washing을 하는데 이 때 washing buffer는 PBST를 사용한다. 이 washing과정은

항체를 붙일 때에는 Primary antibody와 Second antibody를 붙여주는데, Primary antibody는 membrane에 붙어있는 target antigen protein을 인식하여 항원의 특정 부위에 binding을 한다.
이 때 적절한 희석이 중요한데 혼합물에서 우리가 원하는 단백질을 검출하기 위해서는 non-specific background를 최소화 하는 범위로 맞추어야 한다. 이때 비율은 보통 1:1000이나 1:3000을 이용한다.

참고 자료

없음