Plasmid Preparation and DNA Restriction

목차

1. Introduction
2. Theoretical background
3. Chemical
4. Procedure
5. Results & discussion
6. Conclusion
7. Reference

본문내용

1. Introduction
직접 plasmid를 만들어보고 DNA 제한 효소를 이용하여 원하는 DNA sequence를 잘라서 plasmid에 삽입한다.

2. Theoretical background
1) Plasmid
Plasmid는 bacteria 내부에 복제되면 스스로 증식하고 복제가 가능한 유전 정보를 담고 있는 분자들을 의미한다. 보통 위의 사진처럼 ring 형태로 존재하는데, bacteria의 생존에 직접적으로 관여하지는 않는다. 그리고 다른 종의 DNA를 받아들이는 것이 가능하며 반대로 전달도 해줄 수 있다. 이러한 특징 때문에 plasmid는 생화학 분야에서 광범위하게 이용된다.
이 중에서도 유전공학에서 bacteria 내부의 plasmid를 추출한 뒤 restriction enzyme을 이용하여 plasmid를 자르고, 원하는 DNA를 삽입한 후 복제시키는 기술이 많이 사용되는데 이것을 유전자 재조합 기술이라고 한다. 이 때 plasmid vector가 이용되는데 보통은 실험에 사용하기 위하여 미리 구조를 만들어두는 인공 plasmid를 사용한다. 이 plasmid에 원하는 단백질과 유전자, promoter를 같이 넣으면 원하는 DNA가 들어있는 단백질을 복제할 수 있는 것이다. 대표적으로 인슐린이 위와 같은 방법으로 복제가 가능하다. 이 실험에서는 저번 실험에서 만들었던 GFP DNA를 이용한다.

2) Restriction enzyme
Restriction enzyme은 DNA에서 enzyme 고유의 염기서열을 인식하여 자르는 enzyme이다. Restriction enzyme은 각각의 종류마다 다른 염기서열을 인식하며, 고유의 염기서열 외에는 인식하지 않는다. 원래 restriction enzyme은 bacteriophage가 bacteria를 공격했을 때 bacteria가 스스로를 보호하기 위해 사용되었는데, 이 원리가 유전 공학에서 매우 유용하게 사용되고 있다.

참고 자료

http://en.wikipedia.org
Biochemistry, Stryer, 7th edition