분자생물학 실험 레포트 Ligation & Transformation

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Methods
4. Results
5. Discussion

본문내용

DNA ligation : Nick이 생긴 DNA 또는 linear form인 두 종류의 DNA를 phosphodiester bond를 이루도록 하여 연결시키는 반응

Vector
정의 : 원하는 유전자 단편을 숙주세포 안으로 안정하게 운반하는 vehicle
종류 : plasmid, bacteriophage, cosmid, phagemid 등
구조 및 기능
1. replication origin :
-plasmid 복제 시 처음 인식하는 부위
-self replication 가능하게 함
2. selection marker : 형질전환된 세포 selection 가능
3. multiple cloning site (MCS) :
-제한효소 절단부위가 밀집되어 있는 곳
-cloning을 용이하게 함
-vector의 lacZ gene(lac α-fragment)내에 위치

lac operon
operon : regulatory gene, operator, promoter, structural gene을 포함한 효소합성에 관여하는 일련의 DNA 구조
-E.coli 는 glucose를 탄소원으로 하여 성장함
-주위에 lactose가 풍부할 경우에는 이를 분해하는 효소를 발현하여 galactose와 glucose로 분해하여 이용함
-이 효소의 조절 메커니즘을 lac operon이라함
-lacZ : β-galactosidase, lactose → galactose + glucose
lacY : permease, lactose를 세포내로 투과시키게 도움
lacA : Transacetylase

Alpha-complementation
-lacZ 유전자의 5`부분이 deletion 되어 있는 E. coli β-galactosidase의 ω-fragment만 발현하며, 이 조각은 효소활성 없음
-lacZ 유전자의 3`부분이 deletion 되어 있는 E.coli는 β-galactosidase의 ω-fragment만 발현하며, 이 조각은 효소활성 없음
-ω-fragment와 α-fragment를 만드는 유전자가 한 세포내 존재하면 이 조각들이 결합하여 정상적인 효소 활성을 가지게 됨

참고 자료

없음