단백질 정량실험 결과보고서

목차

1. 목적
2. 원리
3. 방법
4. 결과
5. 고찰
6. 참고문헌

본문내용

1. 목적
BCA 단백질 정량법을 이용해서 샘플의 단백질 농도를 측정해본다.
2. 원리
세포에서 단백질을 추출하고 난 뒤에 미지의 sample에서 단백질을 정량할 때 BCA(Bicinchoninic acid) 정량법을 사용한다. (Pierce방식이라고도 한다.) 단백질이 2가의 구리 이온을 1가의 구리이온으로 환원시키는 성질을 이용하고 있다. BCA가 단백질에 의해 환원된 구리이온과 반응을 하여 보라색의 화합물을 형성한다. (이 방법은 Lowry 방법보다 감도가 좋고, 한 단계의 혼합과정 뿐이라서 매우 쉽게 할 수 있는 방법이다.) 이 화합물은 빛의 특정 영역에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에 분광광도계를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라색 화합물이 생성되었을 것이고, 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수하여 흡수율이 증가하므로 비례식을 이용해 샘플 안의 단백질 양을 가늠할 수 있다. Lowry assay의 변형된 최근의 새로운 방법으로, 간단한 실험을 통하여 단백질을 정량할 수 있다. 우선 BCA 정량법은 다른 방법에 비하여 detergent(SDS, Triton) 등에 의한 영향이 적다. 또한 높은 온도에 아주 민감하고 빠른 반응이 이루어진다. BCA 정량법은 단일시약을 사용하기 때문에 방법이 간단하고 최종시료의 안정성이 높아 넓은 범위의 온도에서 단백질 정량이 가능하다. 그러나, 실온에서 반응이 완전히 수행되지 않아 다량의 단백질을 정량할 때 문제가 될 수 있다. 또한 농축된 단백질 샘플은 희석이 필요하며 반응이 느리고 단백질의 성질이 바뀔 수 있다는 단점이 있다.

<그 림>

이 실험에서는 사용되는 BSA는 소혈청알부민을 뜻한다. 혈장 내에 다량 함유되어 있는 단백질로(총 4g/100mL혈장) 제한효소의 stock 제조용 버퍼에 첨가되어 효소의 안정성을 증가시키는 용도로 이용되고 있다. BSA는 단백질 분해효소에 의한 분해와 표면장력에 의한 반응 튜브 내벽에의 비특이적 흡착 및 열이나 저해물질에 의한 환경변화로부터 효소를 보호하는 기능을 한다.

참고 자료

Pierce™ BCA Protein Assay Kit Instructions(Thermo Scientific)
Technote(Western Blot), 정지은, 서린바이오사이언스(SLB), p.8
네이버 백과사전, BCA assay