[분자유전학] 미생물 도말법, CFU (colony-forming unit)

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
미생물은 자연계에서 널리 존재한다. 특정한 미생물의 기본 형태나 구조, 영양요구조건, 적절한 환경, 다른 미생물과의 상호관계와 병원성 등의 성질을 연구하기 위해서는 필요한 미생물만을 따로 분리하는 분리배양과 그 미생물만 배양하는 순수배양이 이루어져야 한다.
분리배양(isolation culture)은 여러 미생물들이 혼합된 상태에서 특정한 미생물만을 분리하는 방법이다. 균의 특성에 따라 고체 평판배지를 이용한 분리배양과 액체배지를 이용한 분리배양방법이 있다.

<중략>

Methods
-Spreading
1. E.coli를 배지를 10μl 떨어뜨린다.
2. 유리막대에 알코올을 묻혀서 알코올램프를 이용해서 멸균한다.
3. 떨어뜨린 E.coli를 배지가 약간 뻑뻑해질 때까지 전체로 골고루 문지른다.

-Streaking
1. 백금이를 알코올램프에 멸균한다.
2. 식힌 백금이에 E.coli를 찍어 Streaking한다.
3. 처음 Streaking한 부분의 한쪽 끝에서 다시 Streaking한다.
4. 세 번째로 두 번째의 Streaking 부분 끝에서 조금 겹치게 Streaking한다.
5. 37℃로 하루 동안 incubation한다.

-CFU
1. tube에 생리식염수를 0.9ml씩 담는다.
2. 미생물 원액에서 0.1ml를 채취해서 첫 번째 tube에 넣고 잘 섞는다.
3. 첫 번째 tube에서 다시 0.1ml를 채취해서 두 번째 tube에 넣고 잘 섞는다.
4. 이 과정을 다섯 번째 tube까지 반복한다.
5. 각 다섯 개의 tube에서 0.1ml를 채취하여 LB plate에 잘 깔아준다.
6. 37℃에서 하루 동안 incubation한다.
7. 각 희석 농도마다 colony의 개수를 세어 CFU를 계산하여 처음 원액에 미생물이 얼마나 있었는지 예측한다.

참고 자료

정진숙, 미생물학실험서, 을유문화사, 1998,
최호형, 미생물학, 아카데미서적, 2004,
김동한, 표준미생물학, 펴냄 홍, 2000,
허태련, 식품과학, 유한문화사, 2008,