[분자유전학] Blue&White selection
- 최초 등록일
- 2015.12.31
- 최종 저작일
- 2015.12
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목차
I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion
본문내용
I. Introduction
항생제 저항 유전자의 삽입 비활성화가 재조합 확인의 편리한 방법을 제공하지만, 몇몇 중요한 플라스미드 클로닝 벡터는 다른 방법을 이용한다. 그 한 예가 pUC8이며 ampicillin저항 유전자와 lacZ’ 유전자를 지니며 lacZ’는 효소 β-galactosidase에 해당하는 일부 유전자이다. pUC8로 클로닝하는 것은 lacZ’ 유전자의 삽입 비활성화로 β-galactosidase를 합성할 수 없는 것으로 재조합체임을 확인한다.
β-galactosidase는 lactose를 glucose와 galactose로 분해하는데 관여하는 일련의 효소 중 하나다. 이것은 일반적으로 E.coli(대장균) 염색체에 있는 유전자 lacZ에 해당한다. 어떤 균주의 E.coli는 변형된 lacZ’ 유전자를 가지고 있으며 이것은 lacZ’라 부르는 β-galactosidase의 α-peptide 부위에 해당되는 유전자 조각이 없다.
<중략>
Methods
IPTG 100μl, X-gal 20 μl를 LBA에 깔아준다.
Transformed cells를 200 μl씩 plate에 spreading한다.
Plate가 적당히 마르면 뒤집어서 37℃에서 overnight동안 incubation한다.
참고 자료
Lizabeth A. Allison, 분자생물학 입문서, 월드사이언스, 2009,
T.A Brown, 유전자 클로닝 입문, 탐구당, 2004,
진익렬, 게놈미생물학, 월드사이언스, 2005,