유전공학 실험보고서 (단백질추출, 전기영동, nanodrop, RT-PCR, western blotting, Gene cloning)

목차

1장. 시료 마쇄 및 RNA 추출
2장. electrophoresis, nanodrop
3장. RT-PCR (REVERSE TRANSCRIPTION POLYMERASE CHAIN REACTION)
4장. Gel Elution
5장. Gene cloning
6장. PLASMID DNA EXTRACTION IN WHITE COLONY
7장. Enzyme restriction

본문내용

모든 생명체가 가지고 있는 유전물질을 얻기 위하여, 세포벽과 세포막을 풀고 세포 내 유전물질을 제외한 나머지 물질을 응고시켜 가라앉히고 제거하고, 유전물질과 함께 있는 이물질을 세척하여 total RNA를 추출하는 원리이다.
-Trizol 용액 : cell lysis buffer로서 세포벽, 세포막, 핵막을 분해하여 DNA, RNA 등이 이동할 수 있게 만들어준다. phenol과 guanidine isothiocyanate의 혼합용액이다.
-Chlo개form : Trizol용액과 결합하여 분리가 용이하게끔 침전시켜주는 역할을 한다.
-Isopropanol : RNA를 뭉치게 만든다.

<중 략>

성공적으로 재조합된 E.coli는 백색의 콜로니를 형성하고 있으며, 이를 클린벤치 내에서 배지에서부터 순수하게 분리하여 Accuprep plasmid mini extraction kit으로 플라스미드 내부의 DNA만을 추출하는 것이다. 이는 실험2번의 DNA Extraction과 상당히 유사하다.
그리고 추출한 Plasmid DNA를 전기영동으로 bp를 파악하여 3kb의 정상적인 재조합이 이루어졌는지 확인한다.
전기영동을 실시하면 3kb의 크기지만 나타난 크기는 2kb가 나타난다. 이는 DNA의 구조에 따른 속도의 변화에 의해 나타난 것이며, open circuler가 제일 느리고, Linear가 다음이며, supercoiling된 상태가 제일 빠르다. 우리가 추출한 DNA는 supercoiling된 상태이기 때문에 3kb의 위치보다 밑에서 관측이 된다.

<중 략>

1. 클린벤치에 들어가기 전 70% 에탄올로 클린벤치에 닿는 모든 부위를 소독한다.
2. 페트리 디쉬를 들고 이쑤시개를 이용하여 화이트콜로니를 찍은 후 배양액을 담근 튜브에 이쑤시개를 꽂아둔다.
3. E.Coli를 적정온도에 배양시켜 준다.

참고 자료

없음