염기서열 분석을 위한 DNA 정제법

목차

1. Title
2. Date
3. Purpose
4. Materials
5. Methods
6. Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Title: 염기서열 분석을 위한 DNA 정제법
- DNA Purification Kit을 이용한 DNA purification for DNA sequencing

2. Date: 2010.11.11 목요일 1-2교시

3. Purpose
DNA 정제원리와 필요성을 안다. DNA 염기서열 분석 방법과 이용에 대해 알아본다.
1) PCR로 증폭한 DNA 산물을 정제하여 DNA 염기서열분석이 가능한 순도 높은 DNA 시료를 제조한다.
2) DNA 염기서열의 분석 원리를 공부한다. (실제 분석은 외부 기관에 의뢰)
3) 얻어진 분석 결과의 활용에 대해 알아보자 (Bioinformatics)

4. Materials
PCR products, PCR purification kit, microcentrifuge, new microcentrifuge tube

5. Methods
① PCR로 증폭된 DNA를 전기영동하여 확인한 후 PCR tube에 남아있는 용액의 5배 binding 액을 넣고 위, 아래로 2~3회 pipetting 하여 혼합한다.
② Purification column에 PCR 튜브내의 용액을 모두 옮긴다.
③ 12000g, 1min centrifuge한다.
④ 밑에 모인 액체를 따라 버린다.
⑤ Column을 다시 세우고 washing solution을 700㎕ 넣고 12000g, 30sec centrifuge한다.
⑥ 밑에 모인 액체를 따라 버린다.
⑦ 다시 12000g, 1min centrifuge하여 washing solution이 완전히 제거되도록 한다.
⑧ Column을 새 microcentrifuge tube에 옮기고 30㎕의 멸균 3차 증류수를 조심스럽게 중앙에 넣고, 1분간 둔다.
⑨ 다시 12000g, 1min centrifuge한다.
⑩ 위의 Column을 제거하고 밑에 남은 액을 보관한다.
⑪ PCR primer(forward 또는 reverse)와 함께 DNA sequencing 한다.

참고 자료

유전자클로닝입문(제4판)/T.A. Brown/월드사이언스
유전자감식/DNA프로필연구회/탐구당
http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&BLAST_PROGRAMS=megaBlast&PAGE_TYPE=BlastSearch&SHOW_DEFAULTS=on&LINK_LOC=blasthome
http://www.ensoltek.co.kr/Support/tutorial/BLASTinformation.htm
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_22.php
http://www.genehunters.co.kr/Training/01_3_4.htm
http://swiftly1.springnote.com/pages/2226724?print=1