목차
1.Introduction
2.Material
3.Method
4.Result
5.Discussion
본문내용
II. Material
시금치, 음지식물, 양지식물, 여러겹의 거즈, waring blender, 원심분리기, 원심분리tube,
ice, lamp, spectrophotometer, plant efficiency analyser, cuvette, rack, D.W. kimwipes, test tubes, foil
50m mM phosphate buffer(pH7.5), 0.2mM DCPIP, 10mM DCMU
추출액 현탁액
50mM phosphate buffer(pH7.5) 50mM phosphate buffer(pH7.5)
50mM NaCl 50mM NaCl
1mM EDTA
0.5% (w/v) BSA
III. methods
(1)thylakoid막의 분리
1)약 1g의 시금치 잎에 10ml의 추출액을 첨가하여(4ml, 3ml, 3ml씩 넣어 유발에 sample 이 남지 않도록 한다. 유밭에서 2회 마쇄한다.
2)마쇄액을 4겹의 cheesecloths를 사용하여 거른추 1,200 x g(3000rpm 이상)에서 5분간 원심분리한 후 상층액은 버리고 침전물을 10ml의 현탁액으로 현탁한다.
3)현탁액을 다시 1.000 x g(3000rpm)에서 3분간 원심분리하여 얻어진 침전물을 10ml 정 도의 현탁액으러 재현탁한다.
(2)Hill reaction의 측정
1) 11개의 test tube에 0.2mM DCPIP 1ml, buffer 2ml, thylakoid액 1ml을 넣고 이 중 2개의 tube는 aluminum foil로 싸고, 또 다른 1개의 tube에는 20마이크로리터 의DCMU를 첨가한다. 1개의 control test tube에는 thylakoid액 대신 buffer 1ml을 넣는다.
->DCMU의 반응농도는 50마이크로M이 된다.
2)각 2개씩의 test tube들은 광원으로부터 5. 10. 20cm의 거리에 두고 5분간 빛을 조사한다. control과 DCMU가 첨가된 tube들은 5cm의 거리에 둔다. 빛을 끈 후 모든 tube들로부터 빛을 차단한다.
->5 cm test tube의 파란색이 흐려질때까지 반응시킨다.
3)각 tube들의 흡광도를 600nm에서 측정한다.
참고 자료
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D.D. pavia, 문석식, 분광학적 분석입문, 1998,
김창한, 식품분석, 고문사, 1996,
Demeke T, 아담스 RP (1992), PCR의 식물 다당류 그리고 완충기 첨가물의 효력, BioTechniques 12:332 - 334
N, 아담스 RP (1991), DNA에서 식물 다당류 오염물질 제거를 위한 간단한 기술, BioTechniques 10:162 - 166