mRNA, RNA isolation, qPCR(Real time PCR) 방법 protocl 설명 등 정리!

소개글

mRNA 차이를 보기 위해서 mRNA isolation부터 qPCR까지 방법과 주의사항을 적어 두었습니다. 많은 도움이 되길 바라겠습니다.

목차

없음

본문내용

1. 원하는 mRNA 의 real time PCR용 primer를 제작한다.

Primer 제작 사이 길이 100~200 bp정도
17~25개로 TM55~65도 정도로 설계
4염기 이상 상보적인 것은 금지. GC함량 40~60 % 전후 부분적으로 GC또는 AT-rich가 안되게
Total RNA isolation
- 준비 물
(Trizol;, Chloroform;, Isopropyl alcohol;, 75% ethanol;, Auto DW; DEPC[diethyl pyrocarbonate]=Sigma, Cat.# D5758 Vol. 50 ml로 DEPC treated H2o2=0.05% DEPC incubates at room temperature for at least 4 hours[then autoclave for 45 minutes at 121도] 원래 0.1%가 RNase를 inhibition하는데 적절 함)
- Sample이 많을 시 시약은 덜어서 사용.
- 60 mm dish 기준 (100 mm일 경우 2배씩)

참고 자료

없음