생명과학실험 레포트6 Specific activity enzyme kinetics
- 최초 등록일
- 2016.09.29
- 최종 저작일
- 2013.04
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목차
Ⅰ. 실험 일시
Ⅱ. 실험 목표
Ⅲ. 실험원리
Ⅳ. 실험 재료
Ⅴ. 실험 방법
Ⅵ. 실험 결과
Ⅶ. Discussion
Ⅷ. 참고문헌
본문내용
Ⅰ. 실험 일시
2013 / 5 / 3 (금) 3:30pm ~ 5:30pm ~ 2013 / 5 / 10 (금) 3:30pm ~ 5:30pm
Ⅱ. 실험 목표
효소의 활성을 흡광도를 이용하여 측정하는 방법과 specific activity 의 개념을 이해하고, 효소반응속도론 (enzyme kinetic) 에서 기본이 되는 Michaelis - Menten equation 과 Lineweaver - Burk equation 을 이용하여 효소활성의 척도가 되는 Michaelis constant (Km), 최대속도 (Vmax), turnover number (Kcat) 등을 실험적으로 측정할 수 있다.
Ⅲ. 실험원리
- Spectrophotometer (분광광도계)
일반적으로 빛이 물체와 만나면, 빛은 물체의 표면에서 반사되거나 물체에 흡수되거나 물체를 통과하게 된다. 이 중 빛의 흡수현상을 이용하여 시료 용액 중의 빛을 흡수하는 화학물질의 양을 정량할 수 있다. 주로 자외선이나 가시광선 영역에서의 빛의 흡수되는 정도를 측정하는데 빛이 시료를 통과하게 되면 일부 흡수되기 때문에 빛의 광도가 달라짐을 이용한다. 물체에 흡수되는 빛의 양은 흡광물질의 농도마다 다르기 때문에 흡광도를 통해 흡광물질의 농도를 알 수 있다. 비어의 법칙 (Beer's law) 에 따라 흡광도 A (Absorption) 는 물질의 흡광계수 ε, 물질의 농도 c, 용액을 빛이 통과한 거리 ℓ 에 비례한다.
- Bradford assay (단백질정량)
Bradford Assay 는 UV Spectrophotometer 를 이용, 흡광도를 측정하여 standard 물질인 BSA 를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법 중 하나이다. 이 방법은 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. Dye 로는 Bromophenol Blue 를 사용하며, 이 dye 가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다. 단백질의 정량을 위해서는 standard 가 필요한데, BSA 를 이용해 standard curve 를 얻을 수 있다.
참고 자료
생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수
단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태
실험생화학, 월드사이언스, 김승호, 장규태
Wikipedia - PNPP, PNP
레닌저의 생화학, 월드사이언스, Nelson