[실험프로토콜] 액체배지에 미생물 접종 & 배양

소개글

미생물실험에 가장 기초가 되는 액체배지에 미생물 접종 & 배양방법을 설명하였습니다.
LB배지뿐만 아니라 다른 항생제 넣은 배지도 적용할 수 있는 방법입니다.
실제로 사용하는 방법인뿐더러 그림을 그려, 간단한 설명과 함께 첨부하였습니다.

목차

1. Materials
2. Method
3. Using Materials (machine & accessory)

본문내용

Materials

- 균주가 접종되어 있는 plate (E.coli) / LB broth - 항생제 / 삼각플라스크 / 백금이 or 멸균된 이쑤시개 / 호일 / 알코올 램프 / 네임펜 / tip / pipette / clean bench / shaking Incubator

Method

1. clean bench 안에서 삼각플라스크에 LB broth (or 특정 항생제가 들어간 broth)를 넣음. - miniprep같은 plasmid 추출의 경우 3-5ml - 항생제는 사용하는 media에 사용전에 넣는 것이 가장 좋음. : ampicillin (1000X , 100㎍/㎕) : 3-5㎕ : chlorampenicol(1000X , 25㎍/㎕) : 3-5㎕ : kanamycin(1000X , 20㎍/㎕) : 3-5㎕
2. clean bench 안에서 백금이에 균주를 묻혀 LB broth (or 특정 항생제가 들어간 broth)에 넣음.
- 백금이를 멸균하고 하는 것이 좋음. (화염멸균)
3. 삼각플라스크에 호일을 씌우고 네임펜으로 균주 이름을 적음.
- 2번과 3번은 순서를 바꿔도 상관이 없음.
- 균주가 바뀌지 않도록 조심.
4. 37℃ shaking incubator에서 200rpm으로 overnight incubation. - 200rpm으로 shaking한 것은 활발한 에어레이션, 안정적인 운용을 고려한 것이지 특별한 숫자의 의미는 없음.
- shaking은 활발한 에어레이션 때문에 해주는 것.
-16-22시간 정도 키움.
5. 균주가 다 자라면 본 실험에 이용.

참고 자료

없음