[기기분석] GPC(겔크로마토그래피)를 이용한 분자량에 따른 분리

소개글

GPC를 이용한 분자량에 따른 분리에 관한 레포트 입니다.
자료를 굉장히 많이 찾아서 자세하게 작성하였습니다.
GPC와 실험에 나오는 기구나 시약에 대해서 상세한 설명 및 참고사진까지 첨부하였습니다.
고찰부분도 자세히 작성하였기 때문에 도움이 많이 되실 거라고 생각합니다.
참고로 점수는 A받은 레포트입니다.

목차

1. Theme
2. Date
3. Purpose
4. Principle
5. Reagent & Equipment
6. Method
7. Result
8. Discussion

본문내용

(1) 겔크로마토그래피의 정지상 : 분자체(molecular sieve)를 사용
• 친수성이므로 물을 흡수할 수 있고 팽윤됨
(2) 겔의 배제한계
• 배제한계(exclusion limit) : 겔에 침투될 수 있는 분자의 최대 분자량
• 겔에 따라 값이 서로 다름 (1,000~수백만)
• 배제한계와 그보다 작은 어느 한계값 사이의 크기를 가진 분자가 분리됨
• 배제한계가 작은 겔을 사용 : 단백질은 컬럼을 통과, 염은 겔에 유지되어 있음
(3) 겔의 종류
① 바이오-겔 P(Bio-Gel P): 화학적으로 불활성한 분자체 겔(molecular-sieve gel), 아크릴아미드 중합물
• 물에 녹지 않으며, 보통의 유기 용매에도 녹지 않음
• pH 2~11의 범위에서 사용됨
② 아가로오스겔 : 세파로오스(Spharose), Bio-gel A
• 우레아(Urea), 구아니딘 염화수소(guanidine HCl)와 같은 수소결합을 파괴하는 화합물에 저항성을 갖고 있음
• 분자량이 10,000-1.5×108의 배제한계를 가진 겔이 제조되어 있음
③ 세파덱스(Sephadex)
• 단백질 분리에 주로 사용되는 겔여과용 담체의 일종
• 세균 Leucostoc nesebteriodes 가설탕에서 합성하는 덱스트란을 에피클로로히드린으로 가교하여 비즈모양으로 성형한 것
• 큰 고분자 사슬에 있는 수산기 때문에, 매우 극성이며 많은 물을 흡수함
• 화학적으로 안정하며, 흡착이 적고 저압에서의 겔여과에 최적

<중 략>

(1) 칼럼의 크기
• 첨가시료의 양이 많으면 큰 칼럼을 사용해야 분리력이 높음
• 그룹분리는 시료 용액량의 4~5배 용량의 칼럼베드를 사용하여도 되며,
칼럼 베드 내경에 대한 길이 비율이 비교적 작아도 됨
(2) 칼럼의 코팅
• 용매에 젖는 성질을 가진 재질로 된 가는 칼럼(<1cm)은 관벽효과 때문에 분리력이 저하될 수 있음
※ 관벽효과 : 관벽 부근에서의 마찰에 의한 유속의 손실과 겔 입자와 벽의 마찰로 겔이 불균일하게 채워지기 때문에 발생, 칼럼 내경이 작을수록 정도가 큼

참고 자료

없음