단백질 분리정제 및 기능분석

소개글

단백질 분리정제 및 기능분석에 대한 실험레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항

본문내용

AP의 정제과정
1. AP가 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 경우, osmotic shock을 주어 outer membrane만 깨지게 한다.
2. Spheroplast상태일때 centrifuge를 하면 supernatant와 pelet으로 분리된다. (이때, AP는 sup. 에 존재한다)
3. AP의 크기를 이용하여 dialysis를 하여 size 별로 분리한다. Bovine의 경우는 homodimer상태로 kDa=160-180 이다.
4. Bovine의 AP가 75-85℃에서도 stable한 특성을 이용하여 전단계에서 분리한 것에 Heat shock을 준다. 대다수는 열에서 inactivation 되지만, Bovine의 AP는 active 된다.
5. Bovine의 AP가 negative charge를 띠는 것을 이용하여 column chromatography를 사용하면 AP만을 얻을수 있게된다.

<중 략>

기 chromatography형태는 매우 단순하여 분리된 색을 분석하는 정도였다. 그리하여 그 단어의 어원은 색과 분석의 의미를 합친 것이다. 기본적 원리는 친화성 이론(partition theory)으로 그 친화도를 알기 위해 resin을 이용하며 stationary phase 와 moving phase 간의 친화도로 분류하는 것이다. chromatography 는 분리하고자 하는 혼합물 속에 들어 있는 각 성분의 수, 성질, 상대적인 양 등에 대해서 사전에 상세하게 알지 못하더라도 혼합물을 분리할 수 있는 유용한 방법이다. 즉, Chromatograph의 ‘chrom’은 ‘색깔’을 의미하며, ‘graphy’는 ‘분리’를 의미한다. 은 stationary phase와 moving phase로 이루어져 있으며, column을 통과하는 물질이 이들 각각에 흡착되는 정도가 다른 것을 이용하여 그들을 분리해내는 것을 말한다. 주로 stationary phase에는 고체(resin)를, moving phase에는 용매(buffer)를 사용한다.

참고 자료

없음