DNA furification & 전기 영동 예비

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험원리
4. 시약 및 기구
5. 실험방법

본문내용

1) Backgoudns
플라스미드 정제는 genomic DNA의 일반적인 분리방법과 동일하다. 플라스미드를 함유한 세포를 액체 배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 활용해서 분리한다. Cell extract는 단백질을 비롯해서 다양한 물질들이 공존하고 있으며, 이 중 major 성분인 단백질을 제거하고 에탄올 침전으로 DNA를 농축시킬 수 있다. 그러나 genomic DNA 분리와 plasmid 정제에는 중요한 차이점이 있다. 플라스미드의 분리는 일반적으로 chromosomal DNA로부터 분리하여야 한다. 플라스미드 분리방법은 플라스미드 DNA와 bacterial DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리된다. 가장 큰 플라스미드의 길이는 E.coil,의 염색체 길이에 8% 밖에 되지 않으며 대부분이 작다.
플라스미드와 bacteria DNA의 구조에 차이로부터 분리하는 방법이 있다. 플라스미드와 염색체는 구형인데 염색체는 extract시 구형에서 선형조각으로 깨어지며 플라스미드에는 구형으로써 변화가 없다. 이 구조적인 차이점을 이용하여 정제된 플라스미드를 얻을 수 있다.

*플라스미드 : 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다.

*plasmid DNA 는 double strand circular form 으로 존재한다. lysis 방법으로 DNA 를 추출할때, ph가 높아지면 double strand 가 풀어지면서 gDNA 는 벌어지게 된다. 그리고 ph 를 낮추면, 다시 원상복귀가 되야 하는데, 사이즈가 크다보니 서로 엉켜버린다. 하지만 plasmid는 사이즈가 작고, circular form 이니까, 다시 원상복귀가 되며이런 원리를 이용해서 plasmid 만을 따로 분리해 낼 수 있다. 그리고, bacteria 에는 gDNA 와 plasmid 가 존재합니다.

참고 자료

없음