[식물생리학실험]NAA 처리 유무에 따른 Arabidopsis의 IAA19 gene expression 분석

목차

1. 실험 목적
2. 실험 방법
3. 실험 결과
4. 토의 사항
5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
가. 실험 목표
옥신은 식물 생장과 발달의 많은 측면을 조절한다. 옥신은 AUX/IAA protein의 분해를 통해 유전자 발현을 조절한다고 알려져 있다. AUX/IAA protein은 으로 알려진 유비퀴틴 리가아제의 작용을 통해 분해되는 유전자 전사를 조절하는 repressor이고, 옥신은 AUX/IAA 단백질의 분해 속도를 빠르게 조정하는 역할을 한다. E3와 proteasome에 의해 AUX/IAA protein이 분해됨에 따라 IAA19를 포함한 auxin responsive genes가 발현될 수 있게 된다. 이번 실험에서는 NAA를 처리한 Arabidopsis와 NAA를 처리하지 않은 Arabidopsis의 tissue에서 각각 RNA를 분리하여 cDNA를 합성하고, PCR을 진행하여 두 식물체에서 Auxin signaling gene인 IAA19의 발현량이 차이가 있는지 실험적으로 확인해보았다.

2. 실험 방법
가. 실험 과정
1) 실험 Step 1
① RT-PCR에 사용할 cDNA를 만들기 위해 NAA를 처리한 Arabidopsis와 NAA를 처리하지 않은 Arabidopsis의 RNA를 preparation하는 실험을 하였다.
② tube에 담긴 sample을 액체 질소로 얼린 후 즉시 갈아주는 작업을 7번 반복하였다. 이 때 세포 안의 RNase에 의해 RNA가 분해되지 않도록 sample이 녹지 않도록 시간을 지체하지 않도록 하였다.
③ sample이 들어있는 tube에 450㎕의 RLT buf를 넣고 살짝 흔들어 주고 10분 정도 incubation을 하였다.
④ 세포 내에 존재하는 cell debris를 제거하기 위해 보라색을 띤 Lilac spin column에 buffer를 옮긴 후에 13,000rpm에서 약 2분 동안 centrifugation을 해주었다.
⑤ 상층액을 새로운 tube에 옮겼다. 200㎕의 에탄올 용액을 넣은 후에 pink spin column에 용액을 옮겨주었다.

참고 자료

Nihal Dharmasiri & Mark Estelle, 「Auxin signaling and reg㎕ated protein degradation」, p.1
Nathan Zenser 외, 「Auxin mod㎕ates the degradation rate of Aux/IAA proteins」, p.1
Jason W. Reed, 「Roles and activities of Aux/IAA proteins in Arabidopsis」, pp.1-2
Kiyoshi Tatematsu, 「MASSUGU2 Encodes Aux/IAA19, an Auxin-Reg㎕ated Protein That Functions Together with the Transcriptional Activator NPH4/ARF7 to Reg㎕ate Differential Growth Responses of Hypocotyl and Formation of Lateral Roots inArabidopsis thaliana」, p.1
Kate A. Drehera,JessicaBrownb,RobertE.Sawb and Judy Callis, 「The Arabidopsis Aux/IAA Protein Family Has Diversified in Degradation and Auxin Responsiveness」, p.1
Kiyoshi Tatematsu, 「MASSUGU2 Encodes Aux/IAA19, an Auxin-Reg㎕ated Protein That Functions Together with the Transcriptional Activator NPH4/ARF7 to Reg㎕ate Differential Growth Responses of Hypocotyl and Formation of Lateral Roots inArabidopsis thaliana」, p.1