[식물생리학실험]NAA 처리 유무에 따른 Arabidopsis의 IAA19 gene expression 분석
- 최초 등록일
- 2017.09.02
- 최종 저작일
- 2017.09
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목차
1. 실험 목적
2. 실험 방법
3. 실험 결과
4. 토의 사항
5. 참고 문헌
본문내용
1. 실험 목적
가. 실험 목표
옥신은 식물 생장과 발달의 많은 측면을 조절한다. 옥신은 AUX/IAA protein의 분해를 통해 유전자 발현을 조절한다고 알려져 있다. AUX/IAA protein은 으로 알려진 유비퀴틴 리가아제의 작용을 통해 분해되는 유전자 전사를 조절하는 repressor이고, 옥신은 AUX/IAA 단백질의 분해 속도를 빠르게 조정하는 역할을 한다. E3와 proteasome에 의해 AUX/IAA protein이 분해됨에 따라 IAA19를 포함한 auxin responsive genes가 발현될 수 있게 된다. 이번 실험에서는 NAA를 처리한 Arabidopsis와 NAA를 처리하지 않은 Arabidopsis의 tissue에서 각각 RNA를 분리하여 cDNA를 합성하고, PCR을 진행하여 두 식물체에서 Auxin signaling gene인 IAA19의 발현량이 차이가 있는지 실험적으로 확인해보았다.
2. 실험 방법
가. 실험 과정
1) 실험 Step 1
① RT-PCR에 사용할 cDNA를 만들기 위해 NAA를 처리한 Arabidopsis와 NAA를 처리하지 않은 Arabidopsis의 RNA를 preparation하는 실험을 하였다.
② tube에 담긴 sample을 액체 질소로 얼린 후 즉시 갈아주는 작업을 7번 반복하였다. 이 때 세포 안의 RNase에 의해 RNA가 분해되지 않도록 sample이 녹지 않도록 시간을 지체하지 않도록 하였다.
③ sample이 들어있는 tube에 450㎕의 RLT buf를 넣고 살짝 흔들어 주고 10분 정도 incubation을 하였다.
④ 세포 내에 존재하는 cell debris를 제거하기 위해 보라색을 띤 Lilac spin column에 buffer를 옮긴 후에 13,000rpm에서 약 2분 동안 centrifugation을 해주었다.
⑤ 상층액을 새로운 tube에 옮겼다. 200㎕의 에탄올 용액을 넣은 후에 pink spin column에 용액을 옮겨주었다.
참고 자료
Nihal Dharmasiri & Mark Estelle, 「Auxin signaling and reg㎕ated protein degradation」, p.1
Nathan Zenser 외, 「Auxin mod㎕ates the degradation rate of Aux/IAA proteins」, p.1
Jason W. Reed, 「Roles and activities of Aux/IAA proteins in Arabidopsis」, pp.1-2
Kiyoshi Tatematsu, 「MASSUGU2 Encodes Aux/IAA19, an Auxin-Reg㎕ated Protein That Functions Together with the Transcriptional Activator NPH4/ARF7 to Reg㎕ate Differential Growth Responses of Hypocotyl and Formation of Lateral Roots inArabidopsis thaliana」, p.1
Kate A. Drehera,JessicaBrownb,RobertE.Sawb and Judy Callis, 「The Arabidopsis Aux/IAA Protein Family Has Diversified in Degradation and Auxin Responsiveness」, p.1
Kiyoshi Tatematsu, 「MASSUGU2 Encodes Aux/IAA19, an Auxin-Reg㎕ated Protein That Functions Together with the Transcriptional Activator NPH4/ARF7 to Reg㎕ate Differential Growth Responses of Hypocotyl and Formation of Lateral Roots inArabidopsis thaliana」, p.1