[분자유전학 실험] Plasmid DNA 분리&DNA정량법과 전기영동

목차

1. Purpose
2. material
3. introduction
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. Reference

본문내용

3. Purpose : Plasmid DNA란 염색체 밖에 존재하는 DNA(extrachromosomal small circular DNA)로 Plasmid DNA는 그 자체 내에 Replication origin을 가지고 있어서 박테리아 내에서 염색체 DNA 복제와 상관 없이 독자적으로 복제되는 특징이 있다. 이번 실험을 통하여 박테리아의 항생제에 대한 내성이 한 세포에서 다른 세포로 옮겨질 때 plasmid를 통해 이루어져있음을 밝힌다. 또 DNA가 잘 추출되었는지 알아보기 위하여 DNA 정량법을 통해 DNA의 정량을 측정하고, 전기영동을 이용하여 그 분자의 크기를 측정해보도록 한다.

4. material :
Plasmid DNA 분리 – Solution Ⅰ, Solution Ⅱ, Solution Ⅲ, Conical Tube, Eppen tube, V 배양액, Pipette, 원심분리기(센트리퓨즈형), EB buffer, washing buffer, column, SHV, PSE, CMY, TEM.
DNA 정량법 & 전기영동 – Agarose gel, TAE buffer, 전자레인지, Tray, loading dye, DNA, EtBr , 전기영동기, parafilm, 큐벳.

5. introduction :
*Plasmid DNA의 분리 및 정제방법
Plasmid를 정제는 total cell DNA를 일반적인 분리방법과 같다. Plasmid를 지니는 cell을 액체배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 하면된다. Extract는 단백질을 제거하고 에탄올침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다. 그러나 totall cell DNA분리와 Plasmid 정제와는 중요한 차이점이 있다. Plasmid 분리는 일반적으로 많은 양의 chromosomal DNA로부터 분리하여야 한다. Plasmid 분리방법은 Plasmid DNA와 bacterial DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리된다. 가장 큰 Plasmid의 길이는 E.coli의 염색체 길이에 8%밖에 되지 않으며 대부분 작다.

참고 자료

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