[분자유전학실험] SDS-PAGE

목차

1. Purpose
2. material
3. introduction
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. Reference

본문내용

3. Purpose : 단백질을 분리하는 방법은 분리하고자 하는 단백질이 무엇인가에 따라서 매우 다양하다. 단백질이 핵에 존재하는지 세포질에 존재하는지에 따라서 또 단백질의 성질에 따라서 적당한 방법을 선택하여 써야 한다. 정제 되지 않은 전체 단백질을 분리하는 방법을 익히도록 한다.

4. Materials : 30% acrylamide-0.8% PDA(piperazine diacrylamide), 1.5M Tris)-HCl, 10% SDS, DDW, 10% APS, TEMED, 글리세롤, 2-mercapto-ethanol, BPB(bromophenol blue), 영동 glass plate, comb, 가스킷, 클립(2개), 전기영동장치, 플라스틱tray

5. Introduction :
SDS-PAGE는 1970년에 Laemmli에 의해 개발되었다. 본 방법은 아미노산 측 사슬끼리의 결합(S-S결합 등)을 절단하여, 아미노산이 다수 연결된 단일사슬의 polypeptide 상태로 만든다. 이것으로 polypeptide 사슬이 길수록 겔의 망에 걸려 이동도가 작게 되고, 짧은 분자일수록 이동도가 크게 된다. 그러나 단백질은 그것을 구성하는 아미노산 조성의 차이에 따라 각각 특유의 전하(pI)를 가지기 때문에 전압을 걸면 각각의 전하에 따라 이동하게 되고, 단백질의 크기(분자량)의 차이에 의한 분리를 할 수 없다. 거기서 샘플의 단백질의 전하를 똑같이 마이너스로 하기 위해 음이온성 계면활성제인 SDS를 단백질에 결합시켜, 각각의 단백질의 전하를 거의 일정하게(-) 만든 후에 전기영동을 실시한다. 이 때 sample buffer에 DTT나 mercaptoethanol이 첨가되어 있어 disulfide bond도 끊어지게 되어 단백질은 일차구조를 형성하여 이동하게 된다. 이렇게 함으로써 단백질을 분자량의 차이로 분리하는 것이 가능하게 된다.

참고 자료

단백질 실험 핸드북 / 강호일 / 월드사이언스 / 2007년 출판 / p56-59 /
Protein Methods / Daniel M. Bollag, Stuart J. Edelstein / Wiley-Liss / 1991년 출판 /p131-132
개정 제3판 단백질실험노트 / 김승호, 장규태 / 월드사이언스 / 2004년 출판 / p52-55
단백질정제 / 로버트스코프 / 이공자료사 / 1990년 출판 / p297-299
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/protein_purify_ep.php
http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm
http://biology.yonsei.ac.kr/wtklab/PMPexp/SDSPAGE.htm