Westerblot incubation&developing

목차

1) 서론
2) 재료 및 방법
3) 결과
4) 고찰

본문내용

Bradford method란 염료 Coomassie blue를 사용하여 Coomassie blue의 흡광도 변화를 기반으로 측정합니다. 산성 조건 하에서 염료는 청색의 형태로 변환되며, 정전기적 상호 작용을 통해 반데르발스 힘과 amino group에 의해 단백질의 카르복실기와 강한 공유 결합을 형성합니다. 이러한 복합체의 양은 단백질 농도의 척도이며, 흡광도 판독법을 사용하여 추정 할 수 있습니다. 이렇게 청색의 Coomassie blue의 경우 595nm로 유지되는 최대 흡수 스펙트럼을 갖는다. 이 흡광도의 증가는 결합 된 염료의 양과 시료에 존재하는 단백질의 양에 비례한다. 그러나 Coomassie blue는 SDS의 농도에 민감하다. SDS가 고농도로 존재할 때 Coomassie blue와 강하게 결합하여 청색을 띄게 되며, 단백질 존재와는 무관하게 595nm에서의 흡광도를 증가시킵니다. 이와는 반대로 SDS의 농도가 낮다면 SDS가 단백질과 강력하게 결합하여 Coomassie blue와 결합을 억제하여 단백질 농도가 더 낮게 나오게 됩니다.

참고 자료

없음