[화학생물공정실험]DNA의 농도 및 순도의 측정과 Denaturation 및 Renaturation

소개글

DNA의 농도 및 순도의 측정과 Denaturation 및 Renaturation
실험레포트입니다.
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목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 결과
4. 토의 사항

본문내용

1. 실험 목적
가. DNA의 정량방법에 대하여 습득하고, 온도에 따른 변화를 확인함으로서 DNA의 생화학적 특성을 이해한다.

2. 실험 이론 및 원리
가. DNA 농도측정
DNA를 얻었으면 얼마나 있는가, 얼마나 정제되었는가(다른 불순물이 없는가) 알 필요가 있는데 이는 자외선 분광광도 비색 측정법으로 측정한다. Spectrophotometry의 원리는 특정 파장의 빛을 액체에 통과시키면 빛의 강도가 감소하는 것이다. 물질에 따라서, 또 파장에 따라서 빛의 강도의 감소정도가 일정하므로 이것으로 특정 물질의 농도와 다른 물질(불순물)의 농도를 알 수 있다. (자외선 흡수 복사량은 DNA량에 비례; 260㎚에서 흡광도 1.0 은 50㎍의 복선 DNA양과 일치- 260㎚와 280㎚에서 흡광도 비율은 1.8이다. 측정치가(비율이) 1.8미만이면 DNA시료에는 단백질이나 Phenol이 있다는 것이다. DNA와 RNA는 260 ㎚의 빛을 흡수한다. 흡광도(A260)이 1일 때, double strend DNA 의 농도가 50 ㎍/㎖, single strend DNA 의 농도가 33 ㎍/㎖, RNA 의 농도가 40 ㎍/㎖ 으로 알려져 있으므로, 이를 이용하여 DNA와 RNA의 농도를 알 수 있다.
주된 불순물인 protein 의 농도는 A280을 동시에 측정하여 알 수 있다. 일반적으로 A260와 A280의 비가 1.6 - 2.0 정도면 순수한 DNA나 RNA로 본다. 따라서 그래프에서 붉은 색이 순수한 DNA 혹은 RNA의 경우이고, 단백질이 포함된 것을 의미한다.
농도계산: 흡광도 측정 값ⅹ희석비율(%)ⅹDNA측정 상수 값 (50) or RNA측정 상수 값 (40)/단위 ㎕로 환산

참고 자료

없음