Plasmid DNA purification

목차

1. Introduction
2. Result
3. Discussion
4. Reference

본문내용

1) S1 buffer : Cell resuspension solution. glucose, EDTA, Tris-HCl, RNAse를 포함 한다. 세포벽을 제거하기 위해 사용한다.
(1) glucose : E.coli가 세포 내부와 외부의 삼투압 차이로 인해 용해되는 것과 DNA의 분해를 방지한다.
(2) EDTA : 세포 외벽에 존재하는 2가 금속 양이온을 킬레이트화시켜서 세포 외벽을 변성시킨다. Ca2+와 Mg2+가 주요 타겟인데, Ca2+를 킬레이트화시키면 라이소좀의 세포 유입을 가능케 하며 Mg2+를 킬레이트화시키면 DNAse의 작용을 막는다.
(3) Tris-HCl : pH를 약염기성이 되게 하여 ccc(covalently closed circular) DNA의 비가역성 변성을 방지한다.
(4) RNAse : RNA를 분해하여 DNA와 같이 정량되지 않도록 한다.

참고 자료

https://www.uni-hohenheim.de/fileadmin/einrichtungen/pflanzenphysiologie/Protokolle/II.DNA/DNA_plasmid_minireps_hintergrundinfo_en.pdf
https://en.wikipedia.org/wiki/Alkaline_lysis
http://www.geneaid.com/faq/why-does-plasmid-dna-extraction-kit-require-two-washings-two-types-wash-buffers-w1-and-wash
https://info.gbiosciences.com/blog/bid/170540/plasmid-dna-isolation-through-alkaline-lysis-how-does-it-work
https://bitesizebio.com/384/the-basics-how-phenol-extraction-works/
http://www.tribioscience.com/files/101-150.pdf
https://en.wikipedia.org/wiki/Nucleic_acid_quantitation#Sample_Purity_(260:280_/_260:230_Ratios)