Restriction Enzyme & Digestion 실험 -예비,결과,레포트,보고서

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 실험 이론
4. 실험 기구 및 시약
5. 실험 방법
6. 실험결과 및 고찰
7. 참고사항

본문내용

1. 실험 제목
Restriction Enzyme & Digestion

2. 실험 목적
- 제한효소 (EcoRⅠ)를 사용하여 T-vector에 insert DNA가 들어 있는지 확인한다.
- 제한 효소를 이용한 DNA의 절단 및 이를 이용한 재조합 DNA 제조 원리를 익힌다.
- 제한효소에 의한 Cell digestion은 Colony 색 판별, Colony-PCR과 함께 형질전환을 확인할 수 있는 방법이다.
- T-vector에 ligation되어 있는 insert DNA (HPRT1)에는 제한효소부위가 없고, insert
DNA 양끝단 가까이에 EcoRⅠ 절단부위가 있어, digestion 후 이들을 전기 영동하면,
insert DNA와 insert DNA + T-vector 를 분리할 수 있다.

3. 실험 이론
1) EcoRⅠ
대표적인 제한효소의 일종이다. 제한효소는 DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬 을 절단하는 핵산분해효소(endonuclease)의 하나로서 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해서 사용하는 특수한 효소이다. 유전자조작에 필수적인 효소로 DNA 사슬을 절단하는 가 위에 해당하는 효소이다.
파지가 어떤 세균에 감염되면 다른 파지의 감염 효율을 현저히 저하시키는 현상에서 파지 DNA를 특이적으로 소화하는 DNA분해효소가 발견되어 파지감염을 제한한다는 의미에서 제 한효소로 명명되었다.
제한효소는 인식하는 염기, DNA 절단부위의 특성, 효소의 구조에 따라 구분한다.
제한효소의 유형은 크게 세 가지로 나눌 수 있는데 연구에 사용되는 제한효소는 대부분 Ⅱ 형이다. Ⅰ형과 Ⅲ형 제한효소는 원하는 부위를 정확하게 절단할 수 없어서 연구에 적합하 지 않은 반면, Ⅱ형 제한효소는 인식하는 특정자리만 절단한다. Ⅱ형 제한효소가 인식하는 자리는 회문성 염기를 가지고 있는 자리이다.

참고 자료

식품과학기술대사전, 한국식품과학회, 광일문화사, 2008. 4.10
네이버 두산백과
생명과학대사전, 강영희, 도서출판 여초, 2008.
구글 위키백과
인터넷 홈페이지, NANOHELIX, http://www.nanohelix.co.kr/shop/main/index.php
산업응용미생물학, Michael J. Waites 외 3명, 라이프사이언스, 2006, 7, 5.