[일반생물학실험]Gene Cloning

소개글

원하는 DNA 부분을 분리하여 plasmid와 같은 vector DNA에 삽입하고 이러한 recombinant DNA를 세포 내에서 다량으로 증식시켜 얻는 실험 레포트입니다.

목차

1. 실험 이론 및 원리
2. 실험 결과
3. 토의 사항
4. 참고 문헌

본문내용

생물체의 특정 유전자를 세포에서 추출한 후 그 유전자를 벡터 DNA에 삽입하고 Competent Cell에서 증식시킴으로써 균일한 유전자 집단을 생성하는 기술이다. DNA preparation, Insert DNA PCR, 제한효소 처리, Ligation, Transformation의 5가지 과정을 거쳐 진행된다. 먼저 원하는 유전자가 삽입될 플라스미드를 준비하기 위해 대장균을 배양한 후 Alkaline lysis를 이용해 균을 높은 pH에서 강한 음이온 세정제인 SDS로 처리하여 세포벽을 파쇄한다. 이때 염색체 DNA와 단백질, 깨진 세포벽 등은 SDS와 함께 침전되어 가라앉고 플라스미드 DNA는 용액 속에 유리되는데 이들을 원심분리하여 상층액으로부터 플라스미드 DNA를 분리 정제한다. 벡터에 삽입할 insert DNA를 제조하는데에 PCR 기술을 활용해 원하는 유전자의 서열을 증폭시킨다. insert DNA를 준비하는 과정에서 원하는 유전자는 기본적으로 단백질 발현을 위한 전체 염기서열이어야 하고 중간의 mutation이 없어야 한다.

참고 자료

Gene Cloning & DNA Analysis An Introduction 7th Ed. by T A Brown.