유전공학-핵산의 성질과 분리

목차

1. 핵산의 성질
1) DNA의 변성과 재생
2) 혼성화 (hybridization)
3) DNA와 RNA의 안정성

2 핵산의 분리와 정제
1) 플라스미드 DNA 분리
2) 세포의 유전체 DNA 분리
3) 파지 DNA의 분리
4) RNA의 분리
5) mRNA의 분리
6) 핵산의 침전과 보관
7) 핵산의 농도 측정

본문내용

핵산의 성질
1) DNA의 변성과 재생
변성 : 이중 가닥 DNA의 단일 가닥 상태로 변화
재생 : 변성된 DNA가 원래 상태로 회복
변성 요인 : 고온, 높은 pH, 변성제
변성 온도, Tm: 50%의 변성이 일어났을 때의 온도
흡광증가효과 : DNA 변성시 흡광도 증가
2) 혼성화 (hybridization)
: 서로 다른 유래의 단일가닥 DNA가 상보적으로 결합하여 이중가닥 DNA를 형성 하는 것

<중 략>

핵산의 분리 및 정제
1) 플라스미드 DNA 분리
* Plasmid DNA 분리(preparation)의 3 과정
1. 세포용해액 획득
2. 단백질, RNA, 유전체 DNA 제거
3. 순수 플라스미드 DNA 획득
* Plasmid DNA 분리의 2 가지 방법
1. 알칼리용해 (alkaline lysis)방법
2. 끓이기 (boiling) 방법
2) 세포의 유전체 DNA 분리
기본적으로
i) 세포용해(lysis),
ii) 단백질과 RNA의 제거
iii) DNA 추출과
iv) 분리된 DNA의 양과 순도 측정
: 4개의 단계를 거침
(1) 박테리아 세포로부터 유전체 DNA의 분리
3 단계
i. 세포용해 단계 - 동결해빙법 또는 라이소자임 방법
ii. 단백질 및 RNA 제거 단계 - SDS, Proteinase K, RNase
iii. DNA 추출 단계 – 에탄올 침전, 실리카 흡착법
(2) 동물 세포로부터 유전체 DNA의 분리
박테리아 세포로부터 유전체 DNA의 분리와 유사
(3) 식물세포로부터 유전체 DNA의 분리-1
* 단단한 세포벽
* 많은 양의 탄수화물, 2차 대사산물 및 핵산 분해효소 함유
(3) 식물세포로부터 유전체 DNA의 분리-2
CTAB (cetyltrimethyl ammonium bromide)
: 양이온 세제로 세포벽 찌꺼기나 변성된 단백질과 탄수화물을 효과적으로 제거
3) 파지 DNA의 분리
분리의 단계
i. 파지 배양
ii. 파지 입자 분리

참고 자료

없음