알칼리 세포파괴 방법에 의한 플라스미드 DNA의 분리

소개글

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목차

1. Title
2. Abstract
3. Principle
4. Material and method

본문내용

plasmid DNA분리는 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법으로 miniprep이라고 부른다. 그 중 알칼리 세포파괴 방법은 가장 일반적으로 쓰이는 분리방법이다. 세균 세포를 먼저 SDS(이온성 계면활성제 및 단백질 변성제: 세포막의 지질 성분을 용해시켜 세포막 파괴) 및 NaOH (alkali)로 처리하여 세균 세포를 부수는 동시에 DNA 염기쌍의 수소결합을 파괴하여 이중나선 구조를 분리시킨다. 이어서 산성 용액(potassium acetate)을 가하여 중화시키면, 염색체 DNA는 크기가 너무 커서 변성 전의 정상의 상태로 복원되지 못하고 더욱 엉키게 된다. 염색체 DNA와 단백질은 potassium과 SDS간에 형성되는 complex 속에 갇혀 흰색의 침전물로 가라앉는다. 반면 크기가 작고 공유결합으로 연결되어 있는 supercoiled plasmid DNA는 정상적으로 복원이 되어 용액에 녹아 상등액에 남게 된다. 이 방법을 통해 plasmid DNA와 염색체 DNA간의 구조적 차이에 기인하여 plasmid DNA만을 분리할 수 있다.

참고 자료

없음