TA Cloning & Transformation

목차

1.Abstract
2.Introduction
3.Method & Materials
4.Data and Result
5.Discussion

본문내용

이번 실험에서는 과거에 PCR로 증폭시킨 DNA를 TA Vector에 cloning 시키고 수용성 세포인DH5α에 Transformation시키는 실험이었다. TA vector는 양쪽 3’ 말단에 deoxythymidine 한개의 base가 붙어 있는데, 이를 T overhang이라 하며, 이를 이용해서 Taq DNA Polymerase와 ligation시키는데 이러한 과정을 TA Cloning이라고 한다. PCR에서 Taq DNA polymerase를 이용해서 증폭시킨 DNA와 TA Vector가 각각 끝에 상보적인 염기가 위치하고 있어 같은 공간에 넣는다 하여도 서로 ligation 되지 않는다. DNA 두 조각은 DNA strand 한쪽 말단에 존재하는 3’-OH와 다른 한쪽 말단에 존재하는 5’-phosphate 사이에서 ATP에 저장 되어있는 화학적 에너지를 이용해서 두개의 분자를 결합시키는 DNA ligase가 phosphodiester bond를 형성하여 서로 결합되게 만든다. 형질전환(Transformation)은 기존 세포가 가지고 있던 특성들을 다른 특성을 갖고 있는 유전자가 사슬로 된 DNA 조각 또는 plasmid DNA가 새로운 세포 안으로 침투하여 세포에 존재하던 DNA와 결합하게 되면서 세포의 유전적 형질이 변화되는 현상을 의미한다. 실험에서 transformation을 할 때 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 competent cell을 사용한다. 이렇게 competent cell로 transformation 시킨 뒤에 이를Ampicillin이 있는 LB Agar plate에 분주 시키고 배양시킨다.

참고 자료

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