A+보장, 생화학 Cell culture and trypan blue exclusion assay 결과레포트

소개글

약학대학 과정의 생화학 실험 레포트입니다.
(다른 자연과학 생화학 실험의 과정과 거의 유사합니다.)
긴말하지 않겠습니다.
A+ 받았던 결과보고서 입니다.
받아보시면 후회하지 않으실겁니다.

1. Background & Study Aim
- Cell counting
- The need for cell counting
- Methods

2. Materials & Apparatus
- 실험에 필요한 재료 및 기구들을 상세히 기술

3. Protocol
- 실험 과정을 상세히 기술

4. Results
- 실험 결과를 표로 작성
- 계산법 기술

5. Discussion
- 실험 결과에 대한 고찰
- 고퀄리티 보장

6. References
상세 기술

목차

1. Background & Study Aim
2. Materials & Apparatus
3. Protocol
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

1. Background & Study Aim
1) Background
미생물을 배양했으면 배지에 미생물이 대략 얼마 정도 존재하는가를 알아낼 수 있으면 많은 도움이 된다. 예를 들어, 발효식품을 개발할 때 미생물의 수가 얼마 정도가 되었을 때 맛과 향이 최상이 되는가를 알 수 있다면 수리적으로 시스템화하기가 훨씬 쉬울 것이다. 미생물이 지금 배지에 얼마나 존재하고 있는가(정확하게는 세포의 수)를 어떻게 확인할 수 있는가?
첫 번째 방법은 직접 현미경을 들여다보고 직접 하나하나 세는 것이다. 당연히 충분히 희석이 된 상태여야 하며, 별다른 처리 없이 육안으로는 세포들을 분간하기 어려우므로 적절한 염색을 한 후에 관찰한다. 염색은 DNA만을 선택적으로 염색하는 시약을 사용하여 모든 세포를 염색을 하는 방법이 있는데, 세포의 형태나 생리가 어떠하든 간에 DNA만 있다면 모두 염색이 된다. 따라서 어떤 종류의 균인지를 동정하는 것은 불가능하다. 이 방법은 비교적 단순한 광학 현미경으로 관찰자가 직접 세포를 세는 것에 한계가 있고, 죽은 세포와 살아있는 세포를 구분하지 못한다는 단점이 있다. 또 하나의 문제는 균들이 종종 서로 뭉치는 경우가 많다는 것이다.

<중 략>

1. 접종 후 2일 배양하여 동물세포가 충분히 자란 12 well plate의 배지를 micro pipette으로 완전히 제거한다.
2. 배지가 제거된 12 well plate에 PBS 150μl를 조심스럽게 넣어 세포에 묻어있는 배지를 세척해준다.
3. 2. 과정 이후 바로 micro pipette으로 PBS를 제거한다.
4. 12 well plate에 trypsin-EDTA 150μl를 micro pipette을 이용해 골고루 뿌려준 후 1-3분간 Room Temperature에서 incubate한다. (우리 조는 2분간 incubate했다.)
5. 배지 150μl를 넣어 trypsin-EDTA를 불활성화 시켜준다. Dish를 조심스럽게 흔들어 배지를 골고루 섞어 준 다음 pipette으로 세포를 풀어준다.

참고 자료

미생물학실험 (응용) / 저자 유주현 외 / 효일 출판사 / 제5장 현미경에 의한 미생물의 형태 관찰 / 3. 균체의 크기와 수의 측정
"Basic Hemocytometer usage". Han, J.W., Breckon, T.P., Randell, D.A., Landini, G. (2012). "The Application of Support Vector Machine Classification to Detect Cell Nuclei for Automated Microscopy" (PDF). Machine Vision and Applications (Springer) 23 (1): 15–24. doi:10.1007/s00138-010-0275-y. Retrieved 8 April 2013.
Han, J.W., Breckon, T.P., Randell, D.A., Landini, G. (July 2008). "Radicular cysts and odontogenic keratocysts epithelia classification using cascaded Haar classifiers". Proc. 12th Annual Conference on Medical Image Understanding and Analysis (PDF). pp. 54–58. Retrieved 8 April 2013.
http://www.genehunters.co.kr/Training/07_3.htm