[인천대 생명공학실험1 A+] 동물세포배양, 헤마토사이토미터(hemocytometer) 실험결과 보고서
- 최초 등록일
- 2019.12.29
- 최종 저작일
- 2018.12
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소개글
A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 대장균, 세포의 생장곡선 실험결과 보고서 입니다.
Human Dermal Fibroblast(섬유아세포), AsPC-1(췌장암세포), DMEM, FBS(Fetal Bovine Serum), PBS, Trypsin, Passage, Haemocytometer, 직접계수법, CO2 incubator에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.
목차
1. Abstract
2. Information
3. Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6. Conclusion
7. Reference
본문내용
Abstract
이번 실험에서는 AsPC 1 Human Dermal Fibroblast 를 Fetal brovine serum(FBS) 와 culture media(DMEM) 을 이용해 배양관찰 하고 Haemocytometer 로 직접계수법을 사용해 cell count 를 진행했다 PBS, trypsin, 세포의 부착성 으로 passage 를 진행 하고 3 일전 접종한 세포의 상태 (passage 전 ), passage 직후 , passage 한 후 4 일 뒤의 세포의 상태와 모습을 관찰 했 으며 Human Dermal Fibroblast 의 경우 passage 전 , 4 일 뒤 관찰 시 고정된 투명색의 방사형의 세포가 passage 후에는 떠다니는 투명색의 둥그런 형태의 세포가
관찰되었었다 .
<중 략>
동물세포 배양 :먼저 배양된 cell을 현미경을 이용하여 관찰 후 기존에 있던 media를 파스퇴르 파이펫 (유리) 을 suction tube에 꽂아서 흡입하여 제거. PBS buffer 2 mL로 washing을 해주고 넣은 PBS을 제거 후 Trypsin 1 mL 처리한 뒤, 37 ℃ 5 min incubation을 진행.“DMEM+10% FBS” 2 mL 을 넣고 homogeneous cell suspension을 제작 후 100 μL는 counting 용으로 따로 확보하여 cell count를 진행함. 11,800 x g, 5 min간 Centrifuge을 진행. 상층액을 제거 후"DMEM+10% FBS” 6 mL 을 넣고 pipet으로 homogeneous cell suspension을 제작. 새로운 Petridish 3개에 각 2mL씩 passage를 진행하며 37 ℃ cell culture incubator 로 옮겨 배양 진행.
동물세포 count: 전 단계에서 확보한 100 μL cell suspension 이용하며 10 μL of mixture을 헤마토사이토미터의 각 side에 넣어줌. 10개 corners에서 세포 수를 측정하고(both sides of slide) Total cell number을 계산.
참고 자료
Dean R. et al., 생화학 개념과 응용(2017), 라이프사이언스, p204,205
L. G. WADE et al., Organic Chemisty eighth edition. 자유아카데미 . p.501
이진성 et al., 배양배지의 이해 . 바이오사이언스 . p.121, 122, 342 346