[실험방법] Western blotting(웨스턴 블롯팅)-11장 짜리

소개글

실험원리부터 실험방법까지 자세히 기재되었습니다.

목차

western blotting
원리
1. 단백질 검체의 제조
1) Protease inhibitors의 종류
2) 단백질 정량 방법
2. SDS-PAGE
1) SDS
2) Polyacrylamide gel
3) 불연속 완충액 조건
3. 전기에 의한 막으로의 단백질 이동
1) membrane의 종류
2) blotting 방법
4. 비특이결합방지
5. 특정 단백질과 특정 항원간의 항원-항체반응유도
6. 이차항체효소발색반응에 의한 항원항체복합체검출

[실험실습]
1.시약
2.기구
3.1 실험방법순서
3.2 방법
1. gel 만들기
2. Lysis
1)attached cell 일 경우
2)Suspened cell일 경우
3. 단백질 정량
4. 전기영동
5. 단백질 이동
6. 비특이 결합방지
7. 일차항체 처리
8. 이차항체 처리
9. 검출

본문내용

5. 단백질 이동 (wet transfer method)
1) 3MM paper 2장과 PVDF membrane을 gel 크기와 같게 미리 잘라 놓는다.
(손에 묻은 기름이나 분비물이 단백질 이동을 방해할 수 있으므로 반드시 장갑을 착용 한다.)
2) 용기에 차갑게 식힌 transfer buffer를 준비한다.
3) 3MM paper 2장을 2)의 transfer buffer에 담근다.
4) PVDF membrane을 methanol에 15초간 담가놓는다.
5) PVDF membrane을 증류수에 옮겨 2분간 담가놓는다.
6) PVDF membrane을 2)의 transfer buffer에 5분이상 담근다.
7) 유리판을 조심스럽게 제거한 후 gel을 적당한 크기로 잘라 transfer buffer에 적신다.
8) gel, membrane, 3MM paper를 순서대로 조립한다.
(gel/membrane/3MM paper/transfer sponge 사이에 기포가 생기지 않도록 주의한다.)
9) transfer buffer가 담긴 통에 8)에서 조립한 것을 설치한다.
10) 100V로 1시간 동안 전기영동한다.

6. 비특이 결합방지 (Blocking non-spe

참고 자료

없음